酵母细胞处理小体对ASH1 mRNA定位表达的调节作用

摘要

mRNA定位是一种基因转录后水平上的重要调控机制，其对细胞的生理活动和分化发育都有着极其重要的作用。在芽殖酵母有丝分裂中，ASH1mRNA在子细胞芽尖因不对称定位并且表达抑制了子细胞交配类型的转换，母细胞发生交配类型转换。ASH1 mRNA的传送和定位机制在分子水平上已获得了充分的认识，但是在其定位后的翻译调控和降解机制还未得到充分的研究。过去有报道称，酵母细胞中不与核糖体结合或不在翻译状态下的mRNA会马上被降解。最近有研究揭示，细胞内处于沉默状态的mRNA可以被暂时的储存在称为处理小体的转化灶内(Processing bodies，P-bodies)。一旦需要，mRNA可以从处理小体内释放激活，反之，储存的mRNA将会在处理小体内降解。
　　我们用细胞内同源重组的方法敲除酵母细胞处理小体内的关键基因DHH1，在基因缺失的菌株用Western blot检测细胞内Ash1p的表达量的变化，RT-PCR检测基因缺失细胞内ASH1 mRNA的稳定性，同时用免疫共沉淀的方法证实ASH1 mRNA与处理小体构成蛋白Dhh1p结合。然后我们构建质粒Y33-DHH1-GFP,将质粒转化到野生型菌株，同时做原位杂交证明ASH1 mRNA是否存在于处理小体内。我们的实验结果证明了ASH1 mRNA与处理小体蛋白Dhh1p结合，DHH1基因敲除影响细胞内ASH1 mRNA的定位表达和稳定性。从而为处理小体在ASH1 mRNA的定位、翻译、运输及转录后调控等方面重要作用的研究提供实验基础。这些结果指出了ASH1 mRNA定位运输和表达之间相应调节机制。

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第一章 前言

1.1基因表达调控

1.2 mRNA定位

1.3本实验的研究目的和研究内容

第2章酵母细胞基因缺失型菌株构建

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 小结

第3章 酵母细胞Ash1p蛋白和ASH1 mRNA的表达变化

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4 小结

第4章 ASH1 mRNA与DHH1蛋白体内相互作用

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 实验结果

4.4 小结

第5章 处理小体与ASH1 mRNA共定位

5.1 实验材料

5.2 实验方法

5.3 实验结果

5.4小结

第6章讨论与展望

参考文献

致谢

综述： 芽殖酵母ASH1mRNA的定位机制

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