荷S-180肿瘤小鼠血清中细胞因子含量的改变及药物的干预作用

摘要

目的： 1.研究荷S-180移植瘤小鼠血清干扰素γ(IFN—γ)含量的变化，并采用各种已有报道具有抗肿瘤效应或者调节免疫系统作用的药物进行干预，探讨内源性IFN—γ在抗小鼠移植瘤方面的意义。 2.观察S-180移植瘤对小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF—α)含量的影响。 3.研究荷S-180腹水瘤小鼠的无细胞腹水对正常小鼠脾细胞增殖活性、分泌IFN—γ和TNF—α能力的影响。 方法： 1.建立荷S-180实体瘤和腹水瘤小鼠动物模型，在无药物干预的情况下于不同时间点采集血清，用ELISA方法(enzyme—linkedimmunosorbentassay)检测小鼠血清中IFN—γ和TNF-α的含量。 2.肌注氢化可的松(Hydrocortisone，HC)，每天一次，连续7d，致使小鼠免疫功能抑制，然后接种S-180瘤细胞，分别制备实体瘤和腹水瘤小鼠模型，9d后采集血清，用ELISA方法检测小鼠血清中IFN-γ的含量，并分离免疫器官、肿瘤称重，或称量腹水。 3.建立荷S-180实体瘤小鼠模型，分别用灵芝多糖(GanodermaIucidumpolysaccharides，GLP)、环孢素A(CyclosporineA，CsA)、阿司匹林(Aspirin，ASP)灌胃给药，用环磷酰胺(Cyclophosphamide，CP)腹腔注射给药，用HC肌注给药，每天一次，连续9d，用ELISA方法检测小鼠血清中IFN-γ的含量，并分离肿瘤称重。 4.无菌抽取已接种S-180细胞7d的小鼠腹水，离心分离腹水和S-180细胞，分别与正常小鼠脾细胞在37℃下培养48h，收集培养上清用ELISA方法检测其中IFN-γ和TNF-α的含量，或者用MTT比色法检测细胞增殖程度。 5.取正常小鼠脾细胞，分别加入本实验所用的具有抗肿瘤效应或者调节免疫系统作用的药物在37℃下培养48h，收集培养上清用ELISA方法检测其中IFN-γ的含量，或者用MTT比色法检测细胞增殖程度。 结果： 1.首次发现荷S-180实体瘤小鼠血清中IFN-γ含量在所观察的接种后20d内随荷瘤时间的延长而升高，荷S-180腹水瘤小鼠血清中IFN-γ含量在所观察的接种后12d内呈现先上升后下降趋势。 2.发现免疫抑制状态下接种S-180实体瘤和腹水瘤9d后，荷瘤小鼠血清IFN-γ含量超过未荷瘤组，甚至超过正常组小鼠血清IFN-γ含量，但是IFN-γ的升高对肿瘤或者腹水重量却无明显影响。 3.荷实体瘤动物整体给药：GLP(400，200，100mg/kg)使荷瘤小鼠血清中的IFN-γ含量增加、肿瘤重量减轻，但增加IFN-γ含量以高剂量最为明显，抑瘤效应以中剂量最佳，两者之间相关关系无统计学意义。CP(80，40，20mg/kg)使荷实体瘤小鼠血清中的IFN-γ含量降低，而肿瘤重量减轻，且两者随剂量增大同步变化，两者之间有明显相关关系。HC(20，40，80mg/kg)对荷实体瘤小鼠血清中的IFN-γ刺激存在最适剂量，中剂量时可刺激IFN-γ产生，高、低剂量则无明显作用，但中剂量时无明显抑瘤效应，高、低剂量则可抑制肿瘤，IFN-γ和肿瘤重量之间无相关关系。CsA(20，10，5mg/kg)可降低荷瘤小鼠血清中IFN-γ的含量，但对肿瘤重量无明显影响，两者之间无相关关系。ASP(50，25，12.5mg/kg)大剂量使荷瘤小鼠血清中的IFN-γ含量增加、肿瘤重量减轻，两者之间相关关系无统计学意义。 4.体外药物作用：GLP(800，400，200，100μg/ml)各剂量组对S-180细胞均无直接抑制作用。HC(1，10-1，10-2，10-3，10-4mmol/L)较大剂量(10-2mmol/L)开始出现S-180细胞直接抑制作用，有剂量依赖趋势。CsA(10，1，0.1，0.01，0.001μg/ml)对S-180细胞有双向作用，高浓度(10μg/ml)抑制，低浓度(0.01μg/ml)刺激。ASP(10，5，2.5，1.25mmol/L)大剂量(10mmol/L)对S-180细胞有直接抑制作用。 5.荷S-180实体瘤小鼠血清中TNF-α含量在所观察的接种后20d内随荷瘤时间的延长而升高，荷S-180腹水瘤小鼠血清中TNF-α含量在所观察的接种后12d内也随荷瘤时间的延长而升高。 6.发现取自荷S-180腹水瘤小鼠的无细胞腹水体外有强烈抑制正常小鼠脾细胞的增殖作用和抑制脾细胞产生IFN-γ与TNF-α的作用。 结论： 1.免疫抑制状态下接种S-180实体瘤和腹水瘤9d后，荷瘤小鼠血清IFN-γ含量超过未荷瘤组，甚至超过正常组小鼠血清IFN-γ含量，提示免疫功能抑制小鼠的免疫系统比正常小鼠的免疫系统对S-180移植瘤细胞的反应更为强烈。 2.多种药物对荷瘤小鼠血清IFN-γ含量的影响与抑瘤效应无明显相关，提示内源性IFN-γ在抗小鼠S-180移植瘤方面并不是主要的免疫调节因素。 3.荷瘤腹水对正常小鼠脾细胞有强烈抑制作用，可能在肿瘤发生发展过程中起一定作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部分 小鼠IFN-γ与S-180肿瘤细胞

1.1 荷S-180小鼠血清中IFN-γ含量的变化

1.1.1材料与方法

1.1.2结果

1.1.3讨论

1.1.4结论

1.2 药物对荷S-180实体瘤小鼠血清IFN-γ含量的影响

1.2.1材料与方法

1.2.2结果

1.2.3讨论

1.2.4结论

1.3药物在体外对肿瘤细胞的直接作用

1.3.1材料与方法

1.3.2实验结果

1.3.3讨论

1.3.4结论

第二部分荷S-180小鼠血清TNF-α含量的改变

2.1材料与方法

2.2实验结果

2.3讨论

2.4结论

第三部分 其他发现

3.1材料与方法

3.2实验结果

3.3讨论

3.4结论

参考文献

附录中英文缩略词对照表

攻读学位期间成果

致谢