白藜芦醇对人肝癌HepG2细胞周期影响的实验研究

摘要

[研究背景和目的] 白藜芦醇（Resveratrol，3，4，5’-三羟基-反-均二苯代乙烯）是大量存在于葡萄种属植物中的一种多酚类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保护心血管、抑制血小板聚集等生物活性。大量实验表明，白藜芦醇作为知名的化学预防剂及治疗剂对多数肿瘤的起始、增殖、发展3个主要阶段均有抑制乃至逆转作用，白藜芦醇通过对肿瘤细胞细胞周期的不同阶段的阻滞作用是其抗肿瘤作用重要机制之一。 细胞周期是指亲代细胞分裂结束到子细胞分裂结束之间的间隔时期。一个典型的细胞周期按时间顺序确定为四个期：DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）和分裂期（M期）。不同阶段的细胞周期的过渡，主要是在不同的细胞周期调节因子包括细胞周期蛋白（如cyclinA、B、C等）和周期蛋白依赖性激酶（CDK）组成的复合物、增殖细胞核抗原（PCNA）、P53等推动下完成的。细胞周期调控机制的破坏导致细胞失控性生长与肿瘤的发生发展有着密切联系。CDK2与cyclin E组成的复合体是推动G1期向S期转换的关键，在许多恶性肿瘤细胞及组织中存在过度表达的现象，被认为与多种肿瘤的发生与进展相关联。有研究发现，白藜芦醇以剂量和时间依赖的方式诱导细胞周期依赖性激酶抑制蛋白p21的产生，下调cyclinD1，cyclinD2，cyclinE和CDK2，CDK4，CDK6的表达，诱导肿瘤细胞凋亡。 有人发现白藜芦醇能抑制人肝癌细胞系HepG2的增殖并呈现一定的量效和时效关系以及Notas等认为该药是通过对G1和G2/M期的周期阻滞而强烈抑制HepG2细胞增殖并由此导致细胞凋亡。此外，国内外均有研究发现，白藜芦醇作用于人肝痛细胞HepG2，能以剂量和时间依赖的方式诱导CDK抑制蛋白p21的产生，下调cyclinE和CDK2等的表达，造成细胞周期的阻滞。亦有研究显示，在较低浓度下白藜芦醇作用HepG2细胞能够延缓S期进程，高浓度下则将细胞周期阻滞于G0/G1期或G2/M期。本文的目的在于为进一步认识白藜芦醇对人肝癌HepG2细胞周期影响及作用的机制提供更广泛的实验依据。 [研究方法] 本研究以人肝痛细胞系HepG2为研究对象，主要采用流式细胞技术观察不同浓度的白藜芦醇对HepG2细胞细胞生长抑制及细胞周期的影响。并用流式细胞术检测了细胞内CDK2、cyclin E的表达。实验数据以（X+s）表示，采用析因设计的方差分析以及单因素方差分析，均数间多重比较采用LSD方法，方差不齐时采用Dunnet-t方法进行；使用SPSS13.0统计软件对数据进行处理。 [实验结果] 1.白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制; 实验结果表明经白藜芦醇处理的HepG2细胞的增殖活性明显弱于未处理组并介导细胞凋亡。 2.白藜芦醇对HepG2细胞周期的影响; 流式细胞仪分析显示：白藜芦醇（25、50、100μmol/L）处理细胞后，与对照组相比，G0/G1期细胞明显减少，S期细胞均明显增多。说明白藜芦醇能影响HepG2细胞周期，使细胞停滞于S期，抑制细胞DNA的合成。 3.白藜芦醇对HepG2细胞周期蛋白的影响; 流式细胞仪分析显示：白藜芦醇（25、50、100μmol/L）处理细胞后，与照组相比，CDK2及cyclin E表达均有所增加。 [结论] 白藜芦醇主要以浓度依赖的方式影响细胞增殖并介导凋亡，干扰DNA合成，诱导HepG2细胞停滞在S期。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:中英文对照缩略词表

声明

前言

第一部分 白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3实验结果

第二部分 白藜芦醇对HepG2细胞细胞周期的影响

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3实验结果

第三部分 白藜芦醇对HepG2细胞cyclin E、CDK2蛋白表达的影响

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4讨论

全文小结

参考文献

综述 白藜芦醇对几种常见人肿瘤细胞细胞周期的影响

致谢

统计学证明