2-苯基-3,4-噻二唑3,2-α并嘧啶-7-酮(TPh)对人肝癌细胞HepG2细胞周期、凋亡及相关因子表达的影响

摘要

目的初步研究新化学合成药物TPh对人肝癌细胞Hep G2细胞增殖活性、细胞周期、凋亡及相关因子表达的影响,并探讨其作用机制。方法 (1)采用MTT法检测不同浓度的TPh作用不同时间后对Hep G2细胞增殖抑制作用;(2)不同浓度的TPh作用于Hep G2细胞一定时间后,采用Hoechst33258染色法观察Hep G2细胞凋亡形态;(3)采用流式细胞仪检测TPh对人肝癌Hep G2细胞周期的影响;(4)采用Western blotting法检测Hep G2细胞Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 (1)四氮唑盐比色法实验结果表明,TPh对人肝癌Hep G2细胞增殖有抑制作用且呈剂量依赖性,随浓度增加抑制率逐渐加强;(2)Hoechst33258染色结果显示,在荧光显微镜下,正常的肝癌细胞呈浅蓝色荧光,凋亡的肝癌细胞呈亮蓝色荧光,且随药物浓度的增加,肝癌细胞凋亡增多。(3)流式细胞仪检测TPh对人肝癌Hep G2细胞周期的结果显示,与空白对照组相比TPh各剂量组G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期细胞比例有不同程度的减少,G2/M期细胞比例也有不同程度的减少;随着药物浓度的增加凋亡的细胞数目也不断增多;(4)Western blotting结果显示,与空白组相比TPh以药物浓度依赖性抑制Bcl-2蛋白的表达,并且增加Bax基因的表达,TPh各剂量组的Bcl-2/Bax的比值率明显下降,且具有剂量/时间相关性。结论 TPh可抑制人肝癌细胞株Hep G2的增殖,诱导Hep G2细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达有关。