自制α-硫辛酸缓释片对高血脂新西兰兔血脂、血糖及胰岛素的影响

摘要

代谢综合征（metabolic syndrome，MS）是指伴有胰岛素抵抗的一组疾病的聚集。1988年Reaven用“X综合征”描述了各种成人代谢病的集结状态。1989年Kaplan将同时具有中心性肥胖、葡萄糖量减低（IGT）、高血压、高甘油三脂血症称为“死亡四重奏”。此后，曾有学者称之为“胰岛素抵抗综合征”，“多代谢综合征”等，1998年WHO推荐以“代谢综合征”来命名。2003年，国际上将MS编入“国际疾病分类-9”（ICD-9）的临床修正版中（编号为277.7），这说明MS已成为一个正式疾病诊断名称。2004年4月，中华医学会糖尿病学会分会也建议对这种疾病集结情况，采用较笼统并接近临床的命名MS。流行病学和临床研究表明MS的每一种成分都是发生心血管病变的危险因素，同时合并多种异常时发生心血管病的危险性更大，严重影响人们的健康和生活质量，成为社会的沉重负担。目前MS具体的发病机制善不完全清楚，但多数学者认为胰岛素抵抗（IR）是MS的重要中心环节，其他因素如中心性肥胖等通过影响胰岛素的敏感性参与MS的形成和发展。引起MS原因是多方面的，主要是遗传易感性和环境因素互相作用的结果。而不良的生活方式（高热量、高脂饮食、体力活动减少等）是主要的环境因素。随着社会经济和生活方式的改变，MS的患病率逐年上升，美国2000年人口普查资料显示MS已经累及24%的成人（20-70），而在中国已超过10%，MS已严重危害人类的身心健康，成为世界性公共卫生问题。 寻求更好的DM治疗方法一直是医学研究的重点和热点。目前DM的治疗方法多种多样，主要有药物治疗、胰岛素及其类似物治疗、干细胞及胰岛细胞移植治疗和基因治疗，但仍只能处于良好控制，不能根治的水平。近年来的研究发现，线粒体电子传递呼吸链超氧化物产生过多是高糖介导组织损伤的主要原因，氧化应激状态是DM慢性并发症发生发展的“共同土壤”。氧化应激是指机体内高活性分子如活性氧类自由基（reactive oxygen species，ROS）和活性氮类自由基（reactive nitrogen species，RNS）产生过多或消除减少，而导致组织受损。高血糖状态下自由基通过多个途径引起机体损伤，包括晚期糖基化终产物（advanced glycation end products，AGEs）增多，多元醇通路和己糖胺通路活性增高，蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）活化。氧化应激不仅仅是ROS的产生增多，更准确的是氧化与抗氧化之间的一种不平衡。抗氧化系统在糖尿病及其并发症发生过程中发挥着重要的作用。改善氧化应激状态可能成为防治糖尿病慢性并发症的有效措施。因此，抗氧化剂治疗将成为糖尿病药物治疗的重要组成部分。 α-硫辛酸（alpha-lipoic acid，ALA）是一种八碳脂肪酸，在生物体内合成较少。它是所有天然抗氧化剂中功能最多且活性最强的抗氧化剂，被誉为“万能抗氧化剂”。在德国，ALA用于治疗糖尿病诱导的神经病变已达30年以上。以往的研究发现ALA可抑制AGEs的形成，清除自由基和活性氧，减弱氧化应激，同时还能提高骨骼肌细胞，脂肪细胞及2型糖尿病动物的胰岛素敏感性、增强葡萄糖代谢，是预防和治疗糖尿病的重要措施。近来有研究发现ALA可能有改善脂代谢的功能，如防止高胆固醇血症、高甘油三脂血症、高低密度脂蛋白血症等。不难发现ALA既可以改善IR也可以改善脂代谢，极有可能成为防治MS的另一种途径。但研究还发现，静脉输注ALA，可极大地提高胰岛素介导的葡萄糖代谢（30-50%），而口服ALA只有少量的改善（<20%）。这可能是与静脉输注相比，口服ALA后广泛的首过效应（>50%）和较短的血浆半衰期（<0.5小时），血浆中有效浓度持续时间较短所致。为了获得血浆中持久而有效的血药浓度，一般的口服药每天至少需要服药6次。研制一种ALA缓释递药系统有利于减少服药次数，延长半衰期，增加稳定性，提高患者依从性。目前有关ALA制剂种类主要有注射剂、胶囊、软胶囊、片剂等，但国内未见其缓释制剂的研制和相关文献报道。制备一种ALA新剂型-ALA缓释片，将具有巨大的市场前景和很好的经济效益。 目的: 通过处方优化筛选，实验室前期研究制备了ALA缓释片（sustained-release tablet ofα-lipoic acid，SRLA），并建立了质量标准。在此基础上，本课题拟探讨自制SRLA对高血脂新西兰大耳白兔血脂、血糖及血清胰岛素浓度的影响，在动物水平上验证SRLA治疗和预防MS、DM的药效学，为下一步SRLA的临床应用提供理论依据。 方法: 1.高脂饲料配方：1%胆固醇（胆固醇20071206，广州威佳科技有限公司）、8%猪油（自制）、10%蛋黄粉（蛋黄粉20071118，南通康德生物制品有限公司）、81%基础饲料，委托广东省医学实验动物中心加工。 2.动物分组：24只新西兰大耳白兔适应性喂养后，分别按喂养饲料不同分成普通饲料组，高脂饲料组，高脂饲料+SRLA组3组。 3.喂养方法：普通饲料组给予普通饲料150g/日；高脂饲料组给予普通饲料75g/日及高脂饲料75g/日；高脂饲料+SRLA组给予普通饲料75g/日、高脂饲料75g/日和SRLA1片/日。共喂养4周。 4.SRLA给药方法：新西兰大耳白兔使用半圆桶型兔子固定器固定，暴露头部，在新西兰兔的两颊部从下颚处紧紧挤压，从两口角按向口腔内；把开口器插入口腔，固定开口器。事先将SRLA固定在待插胃管一端，另一端插入合适的硬管；把带有药物的一端顺着食道插入胃管，硬管往药物端推进，直到出现落空感，SRLA灌入胃内，拔出胃管。 5.指标检测：4周后取全血离心，检测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血糖（blood glucose）；采用放射免疫法测定血清胰岛素浓度（insulin），并计算胰岛素敏感指数（ISI）。 6.统计分析：用平均值±标准差表示不同实验组的各项检测指标；非正态分布变量（ISI）取其自然对数正态化后进行比较，利用SPSS13.0软件进行单因素方差分析和多重比较，如果满足方差齐性采用单向分类方差分析（one-wayclassification ANOVA）及LSD法进行多重比较；若不满足方差齐性采用近似F检验Welch法方差分析及Tambanes's T2法进行多重比较（已用△表示）。统计图用SPSS13.0制作。 结果: 1.普通饲料组动物四周后检测指标：血糖5.612±0.893mmol/L：血清胰岛素浓度6.750±1.908μIU/ml； ISI0.029±0.009； TC1.175±0.353 mmol/L；TG0.535±0.177 mmol/L：LDL-C0.389±0.187 mmol/L；HDL-C0.460±0.116mmol/L。 2.高脂饲料组动物四周后检测指标：血糖5.700±0.823 mmol/L；血清胰岛素浓度11.000±1.309μIU/ml； ISI0.016±0.003； TC4.986±0.838 mmol/L； TG0.742±0.106 mmol/L； LDL-C2.935±1.004 mmol/L； HDL-C0.914±0.136mmol/L。 3.高脂饲料+SRLA组动物四周后检测指标：血糖5.400±0.995 mmol/L：血清胰岛素浓度6.500±1.604μIU/ml：ISI0.032±0.015：TC1.667±0.416mmol/L； TG0.587±0.172 mmol/L； LDL-C0.620±0.253 mmol/L；HDL-C1.067±0.220 mmol/L。 4.与普通饲料组动物相比，高脂饲料组动物四周后检测血糖无统计学差异（P>0.05）；血清胰岛素浓度显著增高，有统计学差异（P<0.01）； ISI显著减低，有统计学差异（P<0.01）；血清TC及LDL-C显著增高，有统计学差异（P<0.01）；TG及HDL-C显著增高，有统计学差异（P<0.05）。 5.与普通饲料组比较，高脂饲料+SRLA组血糖、血清胰岛素浓度、ISI、TC、TG、LDL-C变化无统计学差异（P>0.05）； HDL-C显著增高，有统计学差异（P<0.05）。 6.与高脂饲料组比较，高脂饲料+SRLA组动物血糖有所降低，但无统计学差异（P>0.05）；血清胰岛素浓度显著降低，有统计学差异（P<0.01）； ISI显著增高，有统计学差异（P<0.01）；血清TC及LDL-C显著降低，有统计学差异（P<0.01）；TG显著降低，有统计学差异（P<0.05）；HDL-C有所增高，但无统计学差异（P>0.05）。 结论: 1.高脂血症新西兰大耳白兔模型：本实验研究证实饲喂本文采用高脂配方饲料4周后，可致新西兰大耳白兔实验性高脂血症。 2.SRLA对高血脂新西兰兔血糖、血清胰岛素浓度、血脂的影响：本实验采用的ALA缓释剂制能降低血糖、降低血清脂质水平及血清胰岛素浓度、改善胰岛素敏感性，提示其在动物体有较长的半衰期及有效的血药浓度，在动物上验证了自制SRLA的药效学。 3.SRLA有可能成为一种防治MS及DM的新制剂，为其的临床应用提供实验依据和理论基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文对照缩略词表

声明

引 言

材料与方法

1.1实验材料

1.2方法

结 果

2.1 α-硫辛酸缓释片对新西兰大耳白兔血糖、血清胰岛素浓度及ISI的影响

2.2 α-硫辛酸缓释片对新西兰大耳白兔血清脂质浓度的影响

讨 论

3.1本实验前期工作

3.2本论文在以上工作基础上，进行了α-硫辛酸缓释片药效学研究

3.3本实验不足之处

结 论

参考文献

攻读学位期间成果

综述：硫辛酸的研究概况

致 谢

统计学证明