广东地区汉族2型糖尿病合并缺血性心肌病及心力衰竭严重程度与ACE2基因A9570G多态性的相关性研究

摘要

随着人们生活水平的提高，劳动方式及饮食结构的改变，平均寿命的延长，糖尿病（diabetes mellitus，DM）的发病率逐年增高，严重危害人们的身体健康。然而，DM本身并不可怕，可怕的是它的并发症。DM可引起多种慢性并发症，其中，DM的血管病变是其最严重的并发症，因DM血管病变而导致的心脏缺血性疾病是DM患者死亡的主要原因。心力衰竭（heart failure）作为各种心血管疾病的共同转归，其发生率随着心血管疾病在人群中总体发生率的升高而升高。近30年来，引起心力衰竭的疾病谱在我国已发生变化，冠心病（coronary heart discasc，CHD）已成为引起心衰的首位原因。缺血性心肌病（ischemic cardiomyopathy，ICM）是CHD的一种临床类型，以左心扩大及心力衰竭为主要表现。DM患者具有显著的CHD好发倾向，被认为是CHD的等危症。DM性CHD与非DM性CHD相比，冠脉病变常广泛且严重，ICM发生率高，且部分ICM患者心力衰竭严重程度与冠脉病变严重程度不一致，提示部分DM合并ICM患者，其心力衰竭不能用心脏大血管病变完全解释，还有其他因素参与DM合并ICM的发生与发展。因此，寻找DM性CHD合并心力衰竭的病因并建立有效的发病风险预测和发病前诊断技术，在临床上具有重要实用价值。事实上，冠状动脉粥样硬化合并心力衰竭是多种危险因素相互作用的结果，DM患者常同时伴有血糖及脂肪酸代谢异常、高血压等冠状动脉粥样硬化及心力衰竭共同危险因素，然而有研究发现，即使各种心血管危险因素相似，DM患者ICM发病率以及心力衰竭程度也存在差异；此外，不同种族DM人群CHD及ICM的发生率也不同，可见传统的心血管危险因素并不能完全解释DM并发ICM的发生率以及心衰的严重程度，其可能与个体遗传背景相关。 2型糖尿病（Type 2 Diabetes mellitus，T2DM）占所有DM患者的95％左右，是威胁人类健康最主要的类型。目前认为，T2DM是由遗传、环境、行为多种危险因素共同参与或相互作用引起的多因子病。遗传学病因研究表明，该病受多基因调控，其并发症也可能受病人遗传背景的影响。目前已发现多种基因与T2DM及其血管并发症发生发展有关。近年来，随着对肾素-血管紧张素系统（Renin-angiotensin system，RAS）的深入研究，其在T2DM及其并发症发生发展中的作用被大量实验所证实，RAS各成员相关基因多态性也备受关注，但研究结果并不一致，有必要深入研究。血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2，ACE2）是2000年发现的RAS新成员，发挥与血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）相拮抗的作用，在RAS中发挥重要作用。已有研究表明，该基因某些位点的多态性与疾病的发生和或表型相关。本研究采用聚合酶链反应-限制性片段多态性（polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）分析法，检测ACE2基因A9570G多态性，通过分析ACE2基因A9570G多态性在不同人群中的分布情况，初步揭示其与T2DM并发ICM的关系，为进一步研究T2DM并发ICM的分子遗传机制打下基础，有助于寻找和建立有效的心血管发病风险预测和发病前诊断技术。通过亚组分析，比较不同基因型间心力衰竭严重程度，寻找可用于判断病情和评估预后的基因型，有助于指导临床治疗。 目的意义: 1.观察ACE2基因A9570G多态性与T2DM并发ICM的相关性，初步确定相关疾病的易感基因。 2.筛选T2DM并发ICM的敏感基因型，有助于易感人群的早期防治。 3.寻找和确定加重心功能衰竭的基因型，根据基因型制定治疗方案，从而使治疗个体化、有效化。 4.从遗传学角度寻找T2DM并发ICM的危险因素，有助于揭示其遗传病因和发病机制。 对象与方法: 1.研究对象: 对照组100例，T2DM患者327例，其中单纯2型糖尿病组（T2DM组）143例，其中2型糖尿病合并缺血性心肌病病组（T2DM+ICM组）88例，2型糖尿病合并其它类型冠心病组（T2DM+CHD组）96例。所有研究对象均空腹抽取外周静脉血4ml，立即提取DNA或低温保存备用。 2.实验方法: 2.1 用PCR-RFLP分析法检测各组ACE2基因A9570G多态性分布情况，同时记录一般临床资料及生化指标，综合分析ACE2基因A9570G多态性与T2DM并发ICM的相关性。 2.2 以T2DM患者是否患有ICM为因变量Y，年龄、T2DM病程、体重指数、收缩压、舒张压、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和等位基因为自变量X，进行二分类的Logistic回归分析，寻找T2DM患者并发ICM的独立危险因素。 2.3 T2DM+ICM组分性别按基因型进行亚组分析，以入院时彩色多普勒超声心动图评价心脏大小及心功能情况，以Genisini积分评价冠脉病变情况，分析不同基因型与心力衰竭严重程度及冠脉病变严重程度的关系。 结果: 1.广东地区汉族人群中存在ACE2基因A9570G多态性。在健康对照组，男性A/G等位基因频率为0.59/0.41；女性A/G等位基因频率为0.52/0.48，AA/AG/GG基因型分别为0.24/0.56/0.2，经X2检验符合Hardy-Weinberg平衡，提示样本具有群体代表性。与香港健康人比较，差异无统计学意义；与高加索人比较，差异有统计学意义。 2.在女性，四组间等位基因频率和基因型分布差异无统计学意义（X2=0.319，P=0.956和X2=1.232，P=0.975）；在男性，四组间等位基因频率/基因型分布差异有统计学意义（X2=11.866，P=0.008），组间多重比较显示：T2DM+ICM组与对照组、T2DM组、T2DM+CHD组比较，差异均有统计学意义，G等位基因频率显著高于其它三组；对照组、T2DM组、T2DM+CHD组三组间两两比较差异均无统计学意义。 3.Logistic回归分析结果显示G等位基因是男性T2DM患者并发ICM的独立危险因素（Exp（B）=6.464，95％CI为1.281-6.786），不依赖于年龄、体重指数、T2DM病程、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白以及高密度脂蛋白； 4.T2DM+ICM组不同基因型间心力衰竭及冠脉病变程度的比较：不同基因型间心力衰竭严重程度的比较：在男性，不同基因型间LVEF和LVFS差异均有统计学意义（t=2.227，P=0.031和t=-3.486，P=0.001），G基因型者LVEF和LVFS显著低于A基因型者；在女性，不同基因型间LVEF和LVFS差异无统计学意义（P=0.260，P=0.773和F=0.188，P=0.829），G基因型者LVEF和LVFS与A基因型者相同。不同基因型间冠脉病变程度的比较：男性和女性各基因型间冠脉Genisini积分差异均无统计学意义（在男性，t=0.315，P=0.547；在女性，F=0.034，P=0.967），G基因型者冠脉Genisini积分与A基因型者相同。 结论: 1、ACE2基因A9570G多态性分布具有种族差异。 2、ACE2基因A9570G多态性与T2DM的发病不相关。 3、ACE2基因A9570G多态性与男性T2DM患者并发ICM的危险性增高相关，G等位基因可能是男性T2DM患者并发ICM的易感基因及独立危险因素。 4、ACE2基因A9570G多态性与T2DM合并非ICM型CHD不相关。 5、G基因型与男性T2DM合并ICM组冠脉病变程度不相关。 6、G基因型与男性T2DM合并ICM组左心衰竭程度相关。 7、只有在男性T2DM伴有ICM的基础上ACE2基因A9570G多态性才发挥作用，提示T2DM并发症是多种因素相互作用的结果，遗传因素必须在其它因素的参与下才起作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

对象与方法

结 果

讨论

结论

参考文献

全文总结

附录 中英文缩略词对照表

攻读学位期间的成果

致谢

统计学审稿证明