高尔基体蛋白73在肝细胞癌诊断与预测疾病预后中的作用

摘要

一.背景和现状: 原发性肝癌(Primary Liver Cancer)是严重威胁我国人民身体健康、减低生存预期的恶性肿瘤，70％～85％为肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma)，本文主要研究肝细胞癌，以下简称肝癌。原发性肝癌的发病率与病死率分别占恶性肿瘤的第六位及第三位，2008年全球新增748，000例肝癌患者，死亡患者695，900例，新发病例及死亡病例约有一半发生在我国，而广东地区是肝癌高发地区之一，对肝癌的早期诊治尤为重要。 导致肝癌的病因至今未明确，我国肝癌患者患病的高危因素主要包括:存在慢性乙型或丙型肝炎病毒感染，长期食用被黄曲霉毒素污染的食物，以及农村中饮用水源的污染等。近年来，因长期酗酒引起的酒精相关性肝硬化-肝癌的比例有所增高;而伴随乙肝疫苗免疫接种的全面展开，可以预见未来我国乙肝相关性肝癌的发病率会逐渐下降。 因肝癌特别是中晚期肝癌预后很差，提高其早期检出率，使尽可能多的患者在疾病早期接受治疗，是提高患者远期生存的关键。目前推荐对肝癌高危人群每6个月进行筛查，检查项目包括血清甲胎蛋白(Alpha fetoprotein，简称AFP)检测和肝脏超声检查。肝癌高危人群主要包括:1.对于乙肝病毒携带者，满足以下任一条件:男性年龄大于等于40岁，女性年龄大于等于50岁，乙型肝炎病毒所致肝硬化，有肝癌家族史;2.对于非乙肝相关性肝硬化患者需满足以下任一条件:存在丙型肝炎病毒感染，酒精相关性肝硬化，遗传性血色沉着病，原发性胆汁性肝硬化等。多数临床研究显示: AFP诊断肝癌的敏感性在60％左右，特异性在80％-90％之间，有近40％的肝癌患者血清AFP检测呈阴性，检测结果并不理想，临床上亟需寻找新的肝癌血清标记物弥补AFP的不足。理想的肿瘤标记物应具备高特异性，以使肝癌与肝硬化再生结节、肝炎或其它疾病容易区分，同时具有高敏感性，可以在疾病早期进行诊断。 近年来，针对肝癌肿瘤标记物的研究成为基础与临床医学中的热点。用于辅助肝癌诊断的血清标志物主要包括:AFP及其异质体AFP-L3(Lectin-boundAFP,简称AFP-L3)、r-谷氨酰转肽酶(Gamma glutamyl transpeptidase，简称GGT)、α-L-岩藻糖苷酶(Alpha-L-fucosidase，AFU)、异常凝血酶原(Des-gammacarboxyprothrombin，简称DCP)、高尔基体蛋白73(Golgi protein73，简称GP73)等。当前，国内外研究报道显示血清中GP73在肝癌诊断方面敏感性、特异性与AFP相当，联合AFP检测效果较好，GP73在肝癌诊断领域的优势已初步显现。 我国毛一雷等学者报道的包含4217例肝癌患者的大样本研究对指导我国肝癌诊断发展与进步很有意义:其中健康受试者1690例，乙肝病毒携带者337例，肝硬化患者512例（其中乙肝相关性肝硬化320例，丙肝相关性90例，其它原因导致102例），肝癌患者789例，其它肝脏恶性肿瘤患者61例，肝脏良性疾病患者206例，以及14种肝外不同部位的恶性肿瘤患者622例。结果表明肝癌患者血清中GP73浓度显著高于其它各组患者，当取血清GP73相对单位8.5为诊断肝癌临界值时，其诊断灵敏度与特异度分别为74.6％和97.4％，均高于AFP检测的58.2％和85.3％，显示了其在肝癌诊断领域的优势。 二.目的和意义: 广东省是我国的肝癌高发地区之一，给社会和家庭带来沉重经济和心理负担，对其早诊早治可在一定程度上改善患者生活质量以及远期预后。广东省人民医院（广东省医学科学院）每年收治肝癌患者数千例，相当一部分患者确诊时已属中晚期，失去了手术治疗最佳时机，提高早期检出率对改善患者预后意义重大。目前，多数医疗机构在肝癌筛查中使用AFP作为检查指标，势必会造成对AFP阴性病例一定的漏检率。通过本次临床基础研究，可初步探讨血清中GP73是否可作为我院肝癌患者的筛查指标，GP73联合AFP是否可提高诊断效能，并初步建立我院血清GP73的检测规范流程。目的如下: 1.探讨血清中高尔基体蛋白73是否可作为肝癌患者的诊断标记物; 2.探讨血清中GP73与AFP在肝癌诊断中的作用比较; 3.探讨血清中GP73与肝癌患者临床特征之间是否存在相关性; 4.探讨血清中GP73在肝癌患者影像学M-RECIST分期不同阶段的变化情况; 5.探讨血清中GP73、AFP浓度高低与患者预后之间是否相关。 三.研究方法; 1.临床课题研究人群的确定: 通过广东省人民医院介入治疗科临床患者血液标本库系统，检索2011年11月至2012年11月就诊于我科、诊断为肝癌患者的临床信息，要求患者基本信息完整，临床检查指标完善，且同时满足在就诊我院前未于其它医疗机构进行任何抗肿瘤治疗。肝癌诊断标准符合2011版《原发性肝癌诊疗规范》:i.病理诊断:肝脏占位病灶、肝外转移灶活检或手术切除组织标本，经病理组织学和/或细胞学检查确诊;ii.临床诊断:结合慢性肝病背景，影像学检查结果以及血清AFP水平确诊。患者在满足i和/或ii诊断条件的同时，必须满足以下条件:①年龄＞18岁;②排除合并其他部位原发恶性肿瘤;③肝功能Child-Pugh分级（Child-Pugh Classification，简称肝功能CP分级）A级或B级;④预计生存期≥3个月;⑤不存在消化道出血等严重并发症。肝癌患者排除标准:①血液标本保存欠佳（标本编号无法识别，血液标本量过少）;②年龄＞70岁;③存在严重心肺功能障碍;④妊娠。 根据检索结果并查阅相关病案资料，初步筛选出符合条件的肝癌患者87例，因部分患者血液标本保存不佳，最终入选研究标本数59例。根据修订后的实体瘤影像学M-RECIST标准(Modified response evaluation criteria in solid tumor,简称M-RECIST)对59例患者进行随访，包括再次入院进行临床检查、门诊随诊，电话随访，必要时再次治疗，其中共有21例患者在研究期间完成随访，影像学评价疾病出现进展。 通过广东省人民医院介入治疗科临床患者血液标本库系统，检索2011年11月至2012年11月就诊于我科、诊断为肝硬化患者的临床信息，应排除肝恶性肿瘤，入选标准如下:①年龄＞18岁;②肝功能CP分级A或B级;③预计生存期≥3个月;④排除消化道出血等严重并发症。肝硬化患者排除标准:①血液标本保存欠佳（标本编号无法识别，血液标本量过少）;②年龄＞70岁;③存在严重心肺功能障碍;④妊娠。最终选取符合条件的患者血清标本23例。 同时间段选取我科血液标本库中健康受试者血清标本33例，入选标准如下:①年龄＞18岁;②肝功能CP分级A或B级;③排除感染肝炎病毒可能。健康受试者排除标准:①血液标本保存欠佳（标本编号无法识别，血液标本量过少）;②年龄＞70岁;③存在严重心肺功能障碍;④妊娠。 2.研究方法: 血清GP73浓度定量测定采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedImmunosorbent Assay，简称ELISA法)，ELISA试剂盒购自北京热景生物技术有限公司，试剂盒已被批准应用于临床人体检测。 肝癌患者实体瘤影像学M-RECIST评价、巴塞罗那分期(Barcelona ClinicLiver Cancer，简称BCLC分期)、肝功能CP分级评分由我科2名主任医师分别进行评定。 肝癌患者临床指标如:年龄、性别、肝炎病毒感染、肿瘤直径大小、肿瘤转移、肿瘤个数等来源于临床实验室检验或影像学检查结果回报。 采用SPSS13.0软件进行数据分析。计量资料不符合正态分布，采用独立样本非参数检验;计数资料比较采用列联表资料的卡方检验;诊断临界值、灵敏度与特异度采用受试者工作曲线(ROC曲线)判定;采用Spearman方法进行相关分析。 四.试验结果: 肝癌患者血清GP73浓度在肝功能CP分级A、B级间差异有统计学意义(P＜0.001)，与患者年龄、性别、BCLC分期、肝炎病毒感染、肿瘤直径、肿瘤转移、肿瘤个数之间差异均无统计学意义(P＞0.05);肝癌患者、乙肝肝硬化及健康受试者三组间年龄差异无统计学意义(p=0.980); 肝癌患者血清GP73浓度显著高于肝硬化患者及健康受试者，肝癌患者GP73浓度为126.56μg/L(M)，三组间GP73浓度差异有统计学意义(P＜0.001);根据受试者工作曲线（ROC曲线）取值原则，当取GP73诊断肝癌临界值为98.73μg/L时，灵敏度与特异度分别为64.4％、96.4％。 分别以GP73、AFP以及GP73联合AFP为诊断肝癌标准，结果显示:联合检测组较各单独检测组提高了肝癌诊断阳性率，差异有统计学意义(P=0.025)。 对21例完成实体瘤影像学M-RECIST评价的肝癌患者进行动态GP73、AFP监测，结果显示肝癌患者在影像学基线水平、疾病控制期（包括基线水平、部分缓解、完全缓解）及疾病进展期GP73浓度变化差异无统计学意义(P=0.959);21例肝癌患者血清GP73、AFP基线水平分别与至疾病进展时间之间不存在相关关系(r=-0.119, P=0.608;r=0.142, P=0.540)。 五.实验结论: 1.血清中GP73可以作为诊断肝癌的肿瘤标记物，GP73联合AFP检测提高了肝癌诊断阳性率。 2.本研究率先探讨了GP73、AFP浓度与患者影像学评价以及与预后之间的关系，初步显示血清中GP73浓度在肝癌患者影像学M-RECIST各阶段浓度变化不大，基线水平GP73、AFP浓度与疾病进展时间长短无关。

目录

摘要

前言

实验研究方法

一、研究对象选取

二、实验研究方法

三、实验前准备工作

四、实验操作流程

五、实验结果的判定

研究结果

一．分析肝癌患者首诊时血清中GP73浓度与临床特征关系

二．肝癌患者、肝硬化患者、健康受试者GP73浓度的比较

三．GP73诊断肝癌的ROC曲线

四．GP73、AFP与患者影像学评价之间关系

讨论

课题总结

参考文献

综述 高尔基体蛋白73在肝细胞癌研究中的进展

中英文缩略词表

攻读硕士期间研究成果

致谢

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