肝癌诊断标志物高尔基体蛋白73基因在大肠杆菌中的表达

摘要

目的：克隆、表达和鉴定肝癌诊断标志物高尔基体蛋白73基因序列(1028-1327bp)，为抗体的制备及相应检测试剂的研制打下基础。方法：将GP73蛋白基因克隆到表达载体PGEX—4T-2上，构建了重组表达质粒PGEX-4T-2／GP73，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达，利用GST亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，并用Western blot和ELISA方法检测其抗原性，并与商品化的GP73抗原进行比较。结果：重组蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，SDS-PAGE显示其相对分子量为37kD，与预计大小一致。Wlestern blot和ELISA实验证实，重组蛋白具有良好的抗原性。结论：本研究成功克隆和表达了高尔基体蛋白73序列，为制备抗体和肝癌诊断试剂的研发究奠定了基础。