柴胡疏肝汤对癫痫-抑郁共病模型大鼠海马TNF-α及5-HT的影响

摘要

背景：
　　癫痫(epilepsy)是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征，以脑神经元异常放电引起反复痫性发作为特征，是发作性意识丧失的常见病之一。临床具有发作性、短暂性、重复性的特点，癫痫与抑郁症显著相关，癫痫患者生存期抑郁症发生率至少30％，抑郁症是影响生活质量最显著的因素，严重抑郁症是癫痫患者自杀的重要原因之一。癫痫患者中抑郁症可出现在痫性发作之前、之后，或者出现在发作期间。合并有抑郁症的患者临床发作的控制往往也不理想，抑郁症可贯穿癫痫疾病整个病理过程中，并影响着痫性发作程度、持续时间及疗效等。
　　癫痫与抑郁共病的机制早期观点认为，癫痫反复发作，患者社会及精神压力大继而出现抑郁症。但近来临床研究逐渐认识到包括抑郁症在内的情志失调是伴随各种脑损害而出现的结果。在癫痫持续状态后8天实验动物可出现焦虑样情志失调，并且癫痫伴抑郁症的病理表现可见海马体积的减少、杏仁核的神经病理损害以及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)功能的异常。中枢存在以5-HT能神经信号通路为主的5-HT轴的神经调节通路，同时5-HT轴参与免疫调节，通过激活交感神经系统，参与调节免疫相关细胞活性，影响细胞因子的释放及抗体的表达，从而影响癫痫。海马在癫痫发展为抑郁共病过程中显得尤为重要，颞叶癫痫模型所引发的炎症表现在海马区。动物实验显示:柴胡有效成分柴胡皂苷α可以显著逆转抑郁模型大鼠脑内单胺类递质，提高5-HT浓度，减少因痫性发作引起的神经细胞损伤。
　　因此，如何正确、有效的防治癫痫抑郁共病称为医学界广泛关注的问题。但目前对于癫痫与抑郁共病的治疗，临床仍然以口服抗癫痫药物为主，联合服用抗抑郁药物为辅。大量证据显示5-HT有抗癫痫作用，对癫痫患者安全有效，甚至西酞普兰可以降低痫性发作50％以上，然而有研究认为抗抑郁药物5-HT再摄取抑制剂存在诱发癫痫的风险，临床多数抗抑郁药物注明癫痫患者慎用，也给癫痫抑郁共病患者的治疗带来阻力。传统中医药治疗本病显示出独特优势，从肝论治治疗癫痫患者，不仅存在抗癫痫作用，还可以调整抑郁状态，同时具有缓效、作用时间长、副作用少、毒副作用轻等特点。本课题以从肝论治为立足点，通过观察柴胡疏肝汤对癫痫-抑郁共病模型大鼠的行为学观察以及大鼠海马中TNF-α和5-HT含量的影响，探讨柴胡舒肝汤对TNF-α、5-HT参与癫痫抑郁共病机制的干预作用，为中医药治疗癫痫与抑郁共病提供实验依据。
　　癫痫在中医学属于“痫病”范畴，我国历代医家很在就在临床中发现癫痫患者中常伴有情志失调表现，而情志失调又以抑郁、焦虑等“肝证”相关的证候表现为主，痫病的病机与肝的疏泄功能异常关系密切，风、痰、瘀三者的产生均为肝失疏泄的病理表现，因此从肝论治是治疗癫痫-抑郁共病的关键所在。
　　目的：
　　本实验“从肝论治”为出发点，通过观察柴胡疏肝汤对氯化锂—匹罗卡品慢性颞叶癫痫-抑郁共病模型大鼠TNF-α和5-HT含量的影响，探讨柴胡舒肝汤对TNF-α、5-HT参与癫痫抑郁共病机制的干预作用以及可能存在的作用途径及机制，为癫痫与抑郁共病“从肝论治”的中医理论提供实验依据。
　　方法：
　　1.实验方法
　　建立氯化锂—匹颞罗卡品慢性颞叶癫痫大鼠模型，造模完成6周后将模型大鼠随机分为5组:分别为西酞普兰组(A)，生理盐水组(B)，柴胡疏肝汤高、中、低剂量组(C、D、E)，A组给予西酞普兰，B组给予生理盐水，C、D、E组分别给予高、中、低不同浓度的柴胡疏肝汤，连续灌胃给药4周，2次/天。干预前后，RT-PCR法检测大鼠海马TNF-α水平，液相色谱-质谱联用检测大鼠海马5-HT含量，通过强迫游泳和糖精偏好实验进行抑郁行为学监测，大鼠痫性发作次数通过录像监测系统24h监测。
　　2.统计学方法
　　运用SPSS13.0统计软件包，计量资料用(x)±s表示，模型筛选采用配对t检验。各组之间的比较采用单因素方差分析(One—way ANOVA)进行统计处理，大鼠痫性发作次数采用单个重复测量的方差分析进行统计处理，P＜0.05表示具有统计学意义，P＜0.01表示有显著统计学意义。TNF-α和5-HT相关性采用双变量相关分析，Spearman相关系数rs=-0.732，P＜0.01。
　　结果：
　　1.药物干预前后模型大鼠抑郁行为的变化
　　与干预前相比，药物干预后西酞普兰组、中药高剂量组、中药中剂量组FST累计不动时间明显缩短(P＜0.01);干预后西酞普兰组与生理盐水组比较，西酞普兰组累计不动时间明显缩短，有统计学意义(P＜0.01);中药高、中、低剂量组与生理盐水组比较，高、中剂量组累计不动时间明显缩短，有统计学意义(P＜0.01)，低剂量组累计不动时间，有统计学意义(P＜0.05);西酞普兰组与中药高、中剂量组比较无明显差异(P＞0.05);中药高、中、低剂量组比较，中药高、中剂量组累计不动时间明显小于低剂量组，有统计学意义(P＜0.01)。与干预前相比，药物干预后西酞普兰组、中药高剂量组、中药中剂量组糖精水消耗量明显增加(P＜0.01);干预后西酞普兰组与生理盐水组比较，西酞普兰组糖水消耗量明显升高，有统计学意义(P＜0.01);中药高、中、低剂量组与生理盐水组比较，高、中剂量组糖水消耗量明显增加，有明显统计学意义(P＜0.01)，低剂量组糖水消耗增加，有统计学意义(P＜0.05);西酞普兰组与中药高、中剂量组比较无明显差别(P＞0.05);中药高、中、低剂量组比较，中药高、中剂量组糖水消耗量高于低剂量组，无统计学意义(P＞0.05)。
　　2.药物干预前后模型大鼠痫性发作次数的变化
　　与干预前比较，用药4周后西酞普兰组、中药高剂量组、中药中剂量组大鼠痫性发作次数明显减少(P＜0.01)。西酞普兰组与生理盐水组比较，西酞普兰组痫性发作次数减少，有统计学意义(P＜0.01);中药高、中、低剂量组与生理盐水组比较，高、中剂量组痫性发作次数减少，有统计学意义(P＜0.01)，低剂量组痫性发作次数无显著变化，无统计学意义(P＞0.05);西酞普兰组与中药高、中剂量组比较无明显差别(P＞0.05);中药高、中、低剂量组比较，中药高、中剂量组痫性发作次数明显少于低剂量组，有统计学意义(P＜0.01)，高、中剂量组对癫痫发作次数的疗效高于低剂量组，低剂量组疗效较差。给药前模型组大鼠痫性发作次数差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　3.给药4周后大鼠海马5-HT含量的变化
　　给药4周后，西酞普兰组、中药高剂量组、中药中剂量组5-HT含量升高。西酞普兰组与生理盐水组比较，西酞普兰组5-HT含量明显增加，有统计学意义(P＜0.01);中药高、中、低剂量组与生理盐水组比较，高、中剂量组5-HT含量增加，有统计学意义(P＜0.05)，低剂量组5-HT含量增加不显著，无统计学意义(P＞0.05);西酞、中药高剂量组、中药中剂量组比较无明显差异(P＞0.05);中药高、中、低剂量组比较，中药高、中剂量组5-HT含量高于低剂量组，有统计学意义(P＜0.05)。
　　4.给药4周后大鼠海马中TNF-α mRNA荧光定量PCR电泳结果集表达量
　　药物干预后，西酞普兰组与生理盐水组比较，西酞普兰组TNF-α mRNA表达量明显减少，有统计学意义(P＜0.01);中药高、中、低剂量组与生理盐水组比较，高、中剂量组TNF-α mRNA表达量减少，有统计学意义(P＜0.01)，低剂量组TNF-α mRNA表达量减少不明显，无统计学意义(P＞0.05);西酞普兰组、中药高剂量组、中药中剂量组比较无明显差异(P＞0.05);中药高、中、低剂量组比较，中药高、中剂量组TNF-α mRNA表达量减少优于低剂量组，有统计学意义(P＜0.01)。
　　结论：
　　1.本实验成功建立氯化锂—匹罗卡品慢性颞叶癫痫-抑郁共病模型，稳定性好，为后续实验做准备。
　　2.通过调节5-HT的水平参与癫痫抑郁共病的发病机制，柴胡疏肝汤高、中剂量具有下调慢性颞叶癫痫抑郁共病模型大鼠海马TNF-α mRNA表达，提高5-HT含量，减少大鼠痫性发作次数，改善抑郁行为的作用。

目录

摘要

第一章 前言

1．1 癫痫与抑郁共病概述及流行病学调查

1．2 癫痫与抑郁共病的病因病机

1．3 癫痫与抑郁共病的治疗现状

1．4 癫痫与抑郁共病的立题依据

第二章 材料与方法

1 材料选择及准备

1．1 实验动物

1．2 主要试剂与仪器

1．3 药物制备

2 建模依据、分组及给药

3 抑郁行为学的观察

4 药物干预前后模型大鼠的视频监控及癫痫发作情况

5 海马中5-HT含量的测定

6 大鼠海马中TNF-α表达量检测

第三章 结果

1 药物干预前后模型大鼠抑郁行为的变化

2 药物干预前后模型大鼠痫性发作次数的变化

3 给药4周后大鼠海马5-HT含量的变化

4 给药4周后大鼠海马中TNF-α mRNA荧光定量PCR电泳及表达量

第四章 讨论

第五章 全文小结

不足之处

展望

参考文献

攻读学位期间研究成果

致谢

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