前B细胞集落增强因子在EA.hy926细胞高氧模型的的作用及机制研究

摘要

目的：
　　支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)是一种慢性肺部疾病，是早产儿最常见的严重并发症之一，长时间吸入高浓度氧气被认为是导致BPD发生的重要因素之一。
　　1.建立EA.hy926高氧细胞模型，观察细胞炎症反应、细胞凋亡和氧化应激;
　　2.探索PBEF是否在EA.hy926细胞高氧模型中表达;阻断PBEF表达，研究细胞炎症反应、细胞凋亡和氧化应激是否发生变化等。
　　方法：
　　1.实验分组EA.hy926细胞呈贴壁生长，培养于含10％FBS的高糖DMEM培养基中。实验分四组，即空气组，将细胞置于5％C02、37℃的培养箱中培养24、48、72小时;高氧组，将细胞置于三联混合气中37℃培养24、48、72小时;沉默组，将细胞转染PBEFsiRNA后，置于三联混合气中37℃培养24、48、72小时;阴性对照组，将细胞转染scramble siRNA后，置于三联混合气中37℃培养24、48、72小时。
　　2.运用化学试剂方法分别检测各组中ROS的表达水平以及细胞增殖水平。
　　3.运用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-timePCR)技术和免疫印迹(Western Blotting)法分别检测各组中PBEF、IL-8、TNF-α mRNA和蛋白表达水平。
　　4.实验数据均以(X)±SD表示，采用SPSS13.0软件进行分析，各组间均数比较方差齐时采用one-way ANOVA进行分析，方差不齐时用Welch法，同一时间点组内两两比较采用t-检验，P＜0.05差异有统计学意义。
　　结果：
　　1.在24、48、72三个时间点高氧组细胞存活率分别比空气组减少16％、17％、21％。而沉默组各时间点细胞存活率明显高于高氧组(P＜0.05)。
　　2.在24、48、72三个时间点高氧组ROS水平明显高于空气组(P＜0.01)。而沉默组各时间点ROS水平明显低于高氧组(P＜0.01)。
　　3.高氧组PBEF、IL-8及TNF-α基因表达水平较同时间点空气组表达显著升高(P＜0.01）;而相对于高氧组，沉默组各时间点PBEF、IL-8及TNF-α基因表达水平明显降低(P＜0.01)。在沉默组中，PBEF基因表达水平比高氧组下降65％(P＜0.01)。阴性对照组与高氧组同时间点基因表达水平无统计学差异。
　　4.同空气组相比，高氧模型组PBEF、IL-8及TNF-α蛋白的表达在各时间点均明显升高(P＜0.01)，而相对于高氧组，沉默组各时间点PBEF、IL-8及TNF-α基因表达水平明显降低(P＜0.01)。在沉默组中，PBEF蛋白表达水平比高氧组下降65％(P＜0.01)。阴性对照组与高氧组同时间点蛋白表达水平无统计学差异。
　　结论：
　　1.高氧组EA.hy926细胞炎症因子以及ROS水平升高，细胞存活率降低，提示体外BPD细胞模型发生炎症反应、氧化应激以及细胞凋亡。
　　2.EA.hy926细胞高氧模型PBEF基因及蛋白水平表达增高，提示PBEF可能参与BPD的病理生理过程。
　　3.沉默PBEF的表达后，高氧组细胞ROS水平、IL-8以及TNF-α基因和蛋白表达水平明显降低，细胞存活率增高，提示抑制PBEF可减轻炎症反应，协同抗氧化作用，减轻细胞损伤。

目录

摘要

前言

第一章 EA．hy926细胞高氧模型的建立

1 材料与方法

2 结果

3．讨论

第二章 前B细胞集落增强因子在EA．hy926细胞高氧模型的作用及机制研究

1、材料与方法

2．结果

3 讨论

参考文献

中英文缩略词表

综述 前B细胞克隆增强因子在炎症相关疾病中的作用研究进展

攻读学位期间发表论文

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