曲尼司特对小鼠烧伤创面愈合的影响及给药时间的研究

摘要

背景：
　　增生性瘢痕是伤口异常愈合所导致，是烧伤和外伤后常见的并发症，常伴有疼痛、瘙痒以及关节活动受限。烧伤后瘢痕增生常导致患者性格孤僻、社交恐惧、甚至自尊受损，严重影响其日常生活质量。以往的研究证实，瘢痕增生是由于生物体内细胞因子分泌紊乱，成纤维细胞异常增生，Ⅰ型和Ⅲ型胶原不成比例的合成与降解造成的纤维化疾病。胎儿无瘢痕愈合实验验证，炎症反应是瘢痕形成的主要原因，且炎症反应程度的高低与肥大细胞(mast cells，MC)的含量呈正相关，当组织受到损伤时，MC立即被激活并发生局部聚集，参与机体的各种损伤修复、免疫等反应。因此降低MC含量或抑制其活性能调节伤口愈合过程中胶原的合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原比例，从而有效抑制瘢痕的增生。
　　曲尼司特（Tranilast，TNL)作为一种过敏介质阻释剂，是不同于H1、H2受体竞争类抗组胺药的新型抗变态反应药物，能有效预防和治疗一些纤维化疾病，其中包括增生性瘢痕，因此也被认为是一种新型的抗瘢痕治疗药物，这在一定程度上已被前期的研究所证实。但关于TNL最佳用药时间及TNL外用药作用研究甚少，因此本研究共设计两个实验，均以深Ⅱ度烧伤小鼠创面作为观测对象，实验一通过不同时间点开始给予口服TNL干预后，定期取创面的新生组织行病理学观察，以发现TNL抑制瘢痕增生的作用是否与药物开始干预的时间有关并找到最佳干预时间点;实验二用TNL滴眼液外滴创面，观察TNL外用能否同样有抑制瘢痕增生的作用，也为TNL临床用于治疗瘢痕类疾病提供一定的理论基础。
　　方法：
　　1.实验动物选取、分组及烧伤模型建立
　　实验一7～8周龄清洁级雄性昆明小鼠66只，于小鼠背部制备深Ⅱ度烧伤创面模型，然后随机分为对照组(n=18)、早期干预组(n=18)、中期干预组(n=18)和晚期干预组(n=12);
　　实验二7～8周龄清洁级雄性昆明小鼠18只，于小鼠背部制备深Ⅱ度烧伤创面模型，然后随机分为空白对照组(n=6)、对照组(n=6)、实验组(n=6)。
　　2.给药方法
　　实验一早期干预组、中期干预组、晚期干预组分别于烧伤创面形成后当天、7d、14d开始给予TNL200mg/(kg·d)灌胃，对照组于烧伤后当天开始每天给予等体积生理盐水灌胃;
　　实验二空白对照组不做处理，对照组及实验组分别于烧伤创面形成后当天开始给予无菌生理盐水和TNL滴眼液（1ml注射器2-4滴，以覆盖创面为准）外滴创面。
　　3.取材
　　定期观察创面愈合情况，实验一各组分别于创伤形成后14、28、42d（晚期干预组于28、42d）随机选取6只小鼠取创面新生组织，实验二各组于烧伤创面形成后42天统一处死。
　　4.标本固定
　　所取标本一式三份，一份甲醛固定，一份戊二醛固定，一份PBS缓冲液固定后置-80℃冰箱保存。
　　5.检测方法
　　5.1 石蜡包埋
　　5.2 切片
　　5.3 HE染色
　　5.4 甲苯胺蓝染色
　　5.5 Masson染色
　　5.6 抗体竞争法
　　5.7 ELISA法
　　5.8 透射电镜技术。
　　结果：
　　各组小鼠创面愈合时间比较差异无统计学意义(F=1.105，P=0.371)。口服TNL和外用TNL滴眼液均能使瘢痕组织中肥大细胞数量、总胶原含量、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值、TGF-β1含量及组胺含量显著降低;且实验一中早期干预组各时间点肥大细胞数量、总胶原含量、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值、TGF-β1含量及组胺含量均显著低于其它组(P＜0.05)，与对照组相比，早、中、晚期干预组成纤维细胞的超微结构均发生明显改变。
　　结论：
　　TNL对小鼠烧伤创面愈合无明显影响;但口服TNL或外用TNL滴眼液干预后能明显降低烧伤后创面新生组织中MC的数量，组胺和TGF-β1的含量，抑制成纤维细胞胶原合成的能力及调节Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的比例，从而抑制瘢痕的形成，且烧伤后即刻进行曲尼司特干预对瘢痕形成的抑制作用最为明显。

目录

摘要

第一章 曲尼司特对小鼠烧伤后瘢痕形成的影响及给药时间的研究

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

第二章 外用曲尼司特滴眼液对小鼠烧伤创面愈合的影响

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

中英文缩略词对照表

攻读学位期间的成果

致谢

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