磷脂酶C非依赖的蛋白激酶C信号通路在甲状旁腺素调节骨代谢中的作用

摘要

甲状旁腺素(Parathyroid Hormone，PTH)是一种促进骨形成的激素类药物。前期研究显示，PTH通过nonPLC/PKC信号途径提升松质骨骨量，改善骨小梁的微结构，研究nonPLC/PKC的信号分子和途径以及骨代谢作用，有利于设计出更好的nonPLC/PKC模拟肽，提高药物的效能，扩大应用范围。前期研究发现该通路可以分成cAMP/PKA依赖途径和非依赖途径，但是该通路的生物学功能尚不清楚。
　　目的:通过现存的PTH模拟肽验证cAMP/PKA依赖的nonPLC/PKC信号通路是否对甲状旁腺素在成骨细胞的增殖、凋亡和成骨分化中的起作用;通过前期合成的cAMP/PKA非依赖的nonPLC/PKC信号特异性模拟肽MY-1肽和MY-2肽，验证其信号通路是否为cAMP非依赖和PLC非依赖途径，并验证模拟肽的抗凋亡作用，体外细胞成骨分化和破骨分化效应;建立卵巢切除的小鼠骨质疏松模型，评价模拟肽MY-1和MY-2的抗骨质疏松作用。
　　方法:取MC3T3E1细胞，低浓度血清处理12小时后，模拟肽间断刺激6小时后用MTT观察细胞的增殖情况，细胞饥饿处理12小时后，模拟肽处理4小时后流式细胞观察模拟肽的抗凋亡效果，成骨诱导分化14天观察碱性磷酸酶染色和酶活性检测，28天后观察钙结节的茜素红染色和钙定量;取小鼠原代颅骨细胞，行ELISA检测MY-1肽和MY-2肽的cAMP和PLC信号通路，并同时行细胞流式凋亡实验，取6周龄的C57BL小鼠的全骨髓细胞，行成骨分化培养和破骨分化培养;取6周龄的C57BL雌鼠，构建卵巢切除的骨质疏松模型，皮下注射PTH模拟肽，分别在4周和8周后处死小鼠，并行胫骨骨小梁结构显微CT分析。
　　结果:对于cAMP/PKA依赖的nonPLC/PKC信号通路，可以促进成骨细胞增殖，抑制成骨细胞凋亡，促进成骨细胞的分化;对于cAMP/PKA非依赖的nonPLC/PKC信号通路，信号通路检测发现MY-1肽和MY-2肽都不能显著激活cAMP和PLC通路，MY-1和MY-2具有良好的抗凋亡效果，在间断刺激培养中，MY-1肽和MY-2肽可以显著促进细胞成骨分化，并表现出低破骨分化的特性，连续刺激同样表现出成骨分化作用和低破骨的特性;使用卵巢切除的小鼠模型，发现卵巢切除组的骨量较假手术组显著降低，注射MY-1肽和MY-2肽的单位骨量4周和8周组较卵巢切除组显著升高，表现出良好的抗骨质疏松效果。
　　结论:cAMP/PKA依赖的nonPLC/PKC信号通路具有促进成骨细胞增殖、促进成骨细胞分化和抑制成骨细胞凋亡的作用;cAMP/PKA非依赖的nonPLC/PKC信号模拟肽MY-1和MY-2体外细胞间断和连续诱导都表现出促进成骨和低破骨分化的特性，并具有良好的抗凋亡作用;动物研究显示MY-1肽和MY-2肽具有良好的抗骨质疏松的作用。

目录

摘要

前言

第一部分 cAMP／PKA依赖的nonPLC／PKC信号通路在PTH调节成骨细胞增殖、凋亡和分化中的作用

1．材料和方法

2．结果

3 讨论与结论

第二部分 cAMP／PKA非依赖的PTH／nonPLC／PKC信号通路在PTH调节骨细胞代谢中的作用

前言

1．材料和方法

2．结果

3．讨论与结论

第三部分cAMP／PKA非依赖的nonPLC／PKC信号通路在PTH抗骨质疏松中的作用

前言

1．材料与方法

2．结果

3．讨论与结论

全文总结

参考文献

缩略词表

攻读学位期间成果

致谢

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