含笑内酯富马酸盐激活PPAR-γ介导NF-κB和AMPK/mTOR通路对db/db鼠肝肾损害的保护作用

摘要

糖尿病(DM)是一个全世界范围内广泛流行的疾病，其肝肾并发症严重威胁着人类的健康。因此，本研究在中医“肝肾同源”理论指导下，探讨含笑内酯富马酸盐(DMAMCL)对2型糖尿病db/db小鼠的肝肾保护作用及其机制，为开发治疗DM肝肾并发症的新药奠定基础。
　　本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一章 含笑内酯富马酸盐对糖尿病db/db小鼠肝损害的保护作用
　　目的:探讨DMAMCL对2型糖尿病db/db小鼠肝损害的保护作用。
　　方法:db/db小鼠随机分为模型组，厄贝沙坦对照组，DMAMCL低、中、高剂量组，另选取db/m小鼠作正常对照组，予DMAMCL、厄贝沙坦和生理盐水灌胃。16周后，检测血甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)，肝组织TNF-α、IL-1β、TG、TC、游离脂肪酸(FFA)及病理检查，逆转录-实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Westem-Blot)检测基因和蛋白的表达，电镜观察自噬小体。
　　结果:DMAMCL治疗后，db/db小鼠体重、肝指数、血糖、血脂、转氨酶及肝组织TG、TC、FFA和TNF-α、IL-1β均降低，肝脏病理改善明显。qRT-PCR和Western-Blot结果显示，PPAR-γ、p-AMPK、Atg7和Beclin-1表达以及LC3BⅡ/Ⅰ比值与模型组相比显著升高，而p-IκBα、p-NF-κB p65和p-mTOR水平较模型组显著降低(P＜0.05);激光共聚焦和电镜检查结果显示，肝组织LC3B表达和自噬小体增多。
　　结论:DMAMCL可能上调PPAR-γ表达，进而抑制NF-κB通路，减轻肝脏炎症反应;其还可能激活AMPK/mTOR通路，诱导自噬，进一步改善db/db小鼠脂肪肝及其肝损伤。
　　第二章 含笑内酯富马酸盐对高糖培养基下脂混合物诱导AML12和LO2细胞的影响
　　目的:进一步探讨DMAMCL对2型糖尿病db/db小鼠肝保护作用的机制。
　　方法:采用高糖培养基下lipid mixture(LM)诱导AML12和LO2细胞月旨肪变性模型，加用PPAR-γ抑制剂(T0070907)和AMPK抑制剂(CompoundC)进行干预，测细胞TNF-α、IL-1p、TG、TC含量及油红O染色，Westem-Blot测相关蛋白的表达，激光共聚焦观察LC3B的变化。
　　结果:DMAMCL干预后，TNF-α、IL-1β和TG、TC含量均降低，油红O染色显示脂质沉积减少。但加用T0070907干预后，脂质沉积显著加重，与模型组比有统计学差异(P＜0.05)。且DMAMCL增加PPAR-γ、p-AMPK、LC3B的表达，降低p-IκBα、p-NF-κB p65和p-mTOR的表达。但经T0070907干预后，PPAR-γ、p-AMPK、LC3B表达降低，而p-IκBα、p-NF-κB p65及p-mTOR表达升高。此外，DMAMCL增加Atg7和Beclin-1表达以及升高LC3BⅡ/Ⅰ比值，而加用Compound C干预后， p-AMPK、Atg7和Beclin-1表达以及LC3BⅡ/Ⅰ比值降低，而p-mTOR表达升高。
　　结论:DMAMCL通过激活PPAR-γ介导NF-κB和AMPK/mTOR信号通路改善高糖培养基下LM诱导AML12和LO2细胞脂肪性变。
　　第三章 含笑内酯富马酸盐对糖尿病db/db小鼠肾损害的保护作用及其机制
　　目的:探讨DMAMCL对2型糖尿病db/db小鼠肾损害的保护作用及机制。
　　方法:实验动物及分组、药物干预同前，观察尿微量白蛋白与尿肌酐比值(UACR)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)，肾组织TNF-α，IL-1p以及肾脏病理、相关蛋白表达的变化。
　　结果:DMAMCL治疗后，db/db小鼠肾重、BUN、Scr、UACR以及组织TNF-α，IL-1β均降低，肾脏病理改变减轻。Westem-Blot和免疫组化结果显示，PPAR-γ、p-AMPK、Atg7、Beclin-1、LC3B表达以及LC3BⅡ/Ⅰ比值与模型组相比显著升高，而p-IκBα、NF-κB p65、p-NF-κB p65和p-mTOR水平较模型组显著降低(P＜0.05)。
　　结论:DMAMCL能改善db/db小鼠肾功能及肾脏病理改变，其机制亦与其激活PPAR-γ介导NF-κB和AMPK/mTOR信号通路有关。

目录

摘要

前言

参考文献

第一章 含笑内酯富马酸盐对糖尿病db／db小鼠肝损害的保护作用

1．实验材料

2．方法

3．结果

4．讨论

参考文献

第二章 含笑内酯富马酸盐对高糖培养基下脂混合物诱导AML12和LO2细胞的影响

1．实验材料

2．方法

3．结果

4．讨论

参考文献

第三章 含笑内酯富马酸盐对糖尿病db／db小鼠肾损害的保护作用及其机制

1．实验材料

2．方法

3．结果

4．讨论

参考文献

全文小结

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