宫颈癌耐紫杉醇Hela/Taxol细胞株的建立及光动力疗法杀伤Hela和Hela/Taxol细胞的研究

摘要

本项研究的目的是比较光动力疗法对Hela细胞和耐紫杉醇的Hela/Taxol细胞的杀伤作用，以探讨光动力疗法治疗宫颈癌和耐化疗药物的宫颈癌是否有疗效。
　　一、人宫颈癌耐紫杉醇Hela/Taxol细胞系的建立及其耐药性的研究
　　①人宫颈癌Hela细胞作为亲代细胞，在培养基中加入紫杉醇，通过逐步递增法筛选出其耐药Hela/Taxol细胞。②观察Hela和Hela/Taxol细胞的细胞形态和生长趋势，分别绘制生长曲线。③MTT法检测不同化疗药物对于Hela和Hela/Taxol细胞的半数抑制浓度(IC50)。④RT-PCR法检测Hela和Hela/Taxol细胞中多药耐药基因P-gp、GST-π和凋亡相关基因Bcl-2、Survivin的表达。⑤免疫荧光法和蛋白质印记法检测Hela和Hela/Taxol细胞中Bcl-2、P-gp、GST-π、Survivin蛋白的表达。
　　与Hela细胞相比，Hela/Taxol细胞具有以下特点:①生长缓慢;②在不同化疗药物作用下，Hela/Taxol的IC50值均有明显的增加，对紫杉醇的耐药性最强，对5-FU的耐药性最差。结果表明Hela/Taxol细胞具有更强的耐药性。③耐药基因P-gp和GST-π的基因和蛋白的表达均增加;④抗凋亡基因Bcl-2和凋亡抑制基因survivin的基因和蛋白表达也增加。
　　二、光动力疗法对Hela细胞和Hela/Taxol细胞的杀伤作用的研究
　　1、实验分组:Hela和Hela/Taxol两种细胞分别设有空白对照组、单纯光敏剂组、单纯光照组、光敏剂+光照治疗组。2、MTT法检测光动力疗法对Hela和Hela/Taxol两种细胞株的抑制作用，并筛选ALA浓度和光照能量的最佳组合参数。3、MTT法比较光动力疗法对Hela和Hela/Taxol细胞的半数抑制浓度差异。4、采用流式细胞仪检测Hela和Hela/Taxol细胞接受光动力作用前后细胞凋亡的影响。5、免疫荧光法检测光动力疗法作用前后两种细胞中P-gp、GST-π、Bcl-2和Survivin蛋白表达的差异。6、裸鼠成瘤实验。
　　1、Hela/Taxol细胞比Hela细胞对光动力疗法更敏感。2、ALA浓度lmmol/L、光照能量5J/cm2为光动力疗法体外杀伤Hela和Hela/Taxol细胞较理想的实验条件。3、光动力疗法可显著诱导Hela和Hela/Taxol细胞凋亡，并抑制细胞中P-gp、GST-π、Bcl-2和Survivin的蛋白表达。4、Hela-PDT和Hela/Taxol-PDT组的细胞均出现细胞凋亡率显著增加。5、裸鼠成瘤实验结果显示:Hela-PDT和Hela/Taxol-PDT组细胞形成的瘤体比Hela和Hela/Taxol细胞形成的瘤体，生长缓慢，最后形成的肿瘤体积小、重量轻。所以光动力疗法可以抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，且对Hela/Taxol细胞形成的瘤体抑制作用更明显。
　　光动力疗法在体外对Hela和Hela/Taxol细胞均有明显抑制增殖，促进凋亡的作用，其中Hela/Taxol比Hela细胞对光动力疗法更敏感，其机理可能与抑制P-gp、GST-π、Bcl-2和survivin的蛋白表达有关。
　　创新点:
　　1、培养出了耐紫杉醇的Hela/Taxol细胞株，并且验证了其耐药性，为今后研究耐药性肿瘤提供重要的研究载体。
　　2、虽然Hela/Taxol细胞存在耐药性，但是当光动力疗法作用于两种细胞时，对Hela/Taxol细胞的抑制率比Hela细胞更高，杀伤作用更明显。

目录

摘要

前言

参考文献

第一章 研究背景

第1节 什么是光动力学疗法

第2节 光动力学疗法的前世和今生

第3节 光动力疗法的原理和机制

第4节 光动力疗法的三大要素

第5节 光动力疗法的优缺点

第6节 光动力疗法损坏的是癌变细胞的生理代谢机能

第7节 光动力疗法在肿瘤治疗中的意义

第8节 与宫颈癌耐药性有关的基因

第9节 凋亡基因

参考文献

第二章 人宫颈癌耐紫杉醇Hela／Taxol细胞系的建立及其耐药性的研究

第1节 实验方法

第2节 实验结果

第3节 小结

参考文献

第三章 光动力疗法对宫颈癌耐药细胞的体外杀伤作用

第1节 实验方法

第2节 实验结果

第3节 小结

参考文献

第四章 结论

第五章 讨论

中英文缩略词对照表

攻读学位期间成果

致谢

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