下调FOXK1表达对结直肠癌细胞系SW480基因表达谱的影响

摘要

目的：
　　结直肠癌的早期发现及早期治疗可提高患者的远期生存率及其生存质量;但由于结直肠癌早期并无明显的、特异性的临床症状或体征，早期诊治该疾病仍有困难。虽然目前已经发现多种和结直肠癌相关的肿瘤标记物，仍难以用于诊断及靶向治疗。此外结直肠癌的高死亡率主要是由于术后肿瘤复发和转移所导致的。因此对结直肠癌发生、侵袭和转移的分子机制的深入研究给早期结直肠癌的发现及相关的靶向治疗提供可能，进而提高患者的生存率及生存质量。研究发现FOXK1能够调控胚胎发育、维持代谢平衡，参与细胞代谢及生长，其与结直肠癌的发生发展有着密切的相关性。实验研究表明其下调能抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭以及转移。本课题主要通过基因芯片检测技术了解下调FOXK1的表达对结直肠癌细胞系SW480基因表达谱的影响以让课题组最终探究其下游基因及其相关机制，为未来开展对结直肠癌的新的靶向治疗提供可能。
　　方法：
　　根据课题组前期实验结果，本课题选取SW480细胞系进行实验，将其分别设置为对照组及实验组，实验组转染FOXK1-siRNA，对照组转染Scrambled-siRNA，通过该RNA干扰技术在肠癌细胞系中靶向敲低癌基因FOXK1，利用蛋白质免疫印迹试验验证转染后的FOXK1表达情况，通过Nanodrop2000超微量分光光度计及Agilent2100Bioanalyzer对RNA进行质检，采用基因芯片技术了解下调FOXK1的表达对肠癌细胞系SW480基因表达谱的影响，以符合|Fold Change|大于2同时P-value小于0.05的条件作为显著差异的筛选标准。
　　结果：
　　结果显示相对于对照组，实验组中有888个基因有显著差异表达，其中有491个基因的表达是上调的，有397个基因的表达是下调的。
　　结论：
　　基因芯片结果提示相对于对照组，许多参与肿瘤发生发展的基因发生了改变。通过KEGG数据库进行pathway分析提示FOXK1可能通过参与多条信号通路调控肿瘤细胞的发生发展。

目录

摘要

前言

第一章 实验材料与试剂

1．5 主要试剂

1．6 主要仪器设备

1．7 相关溶液的制备

第二章 实验方法

2．1 细胞培养冻存、复苏传代及计数

2．2 RNA干扰试验

2．3 基因表达谱芯片检测

第三章 实验结果

3．1 通过蛋白质免疫印迹试验检验转染后FOXK1表达情况

3．2 基因芯片检测SW480细胞间基因表达谱的改变

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢

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