水通道蛋白角度探讨Celebrex对骨关节炎软骨细胞损伤的保护机制研究

摘要

目的：骨关节炎是常见的退行性疾病，是软骨细胞、软骨基质、软骨下骨三者降解与合成偶联失衡的结果，软骨细胞功能变化在软骨基质降解过程中起着重要的作用，维持软骨细胞功能稳定则是重要因素。建立膝骨关节炎模型，观察软骨水肿与AQP1、AQP3分布与含量的关系，从水通道蛋白(AQPs)与软骨细胞损伤的角度出发，探讨西乐葆对骨关节炎抗炎消肿的作用机制。
　　方法：1.动物实验：2月龄雄性SD大鼠，随机分3组：空白对照组、关节炎模型组、西乐葆组，每组15只，木瓜蛋白酶关节腔内注射制备OA模型，模型建立后西乐葆组给予17.85mg/(kg.d)灌胃，空白对照组、关节炎模型组给予等量生理盐水灌胃，每日1次，共4周，取血清ELISA检测IL-1β含量，取左侧膝关节HE染色观察软骨病理改变、甲苯胺蓝染色观察基质蛋白多糖变化、免疫组织化学观察AQP1、AQP3表达变化，刮取右侧膝关节软骨Real-time PCR、Western Blot检测AQP1、AQP3mRNA和蛋白表达变化。2.细胞实验：培养SW1353人软骨肉瘤细胞，甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫细胞化学观察细胞形态，分3组：阴性对照组、IL-1β处理组、IL-1β+Celebrex处理组，CCK8检测细胞存活率，采用IL-1β干预细胞24h、48h，分别收集细胞，Real-time PCR、Western Blot检测AQP1、AQP3、VEGF表达变化。
　　结果：1.SD大鼠造模后4周血清IL-1β含量增加（P＜0.01），软骨面可见缺损，缺损下方部分软骨陷窝内未见细胞核，软骨基质染色不均且淡染，基质蛋白多糖含量减少(P＜0.01)，移行层、放射层软骨细胞AQP1、AQP3表达增强(P＜0.01)，AQP1、AQP3mRNA和蛋白表达均上调，具统计学意义。西乐葆组血清IL-1β含量降低(P＜0.05)，改善软骨损伤程度，基质染色较均匀，减缓蛋白多糖丢失(P＜0.01)，下调移行层、放射层软骨细胞AQP3表达(P＜0.01)，降低AQP3mRNA和蛋白表达(P＜0.01)，AQP1表达变化不显著。2.体外培养SW1353细胞甲苯胺蓝染色为蓝紫色，细胞质Ⅱ型胶原表达阳性，采用IL-1β处理细胞，AQP1、AQP3、VEGF mRNA和蛋白表达均上调(P＜0.01)(P＜0.01)(P＜0.05)，IL-1β+Celebrex处理组AQP3mRNA和蛋白表达显著下调(P＜0.01)，24hAQP1mRNA、48h AQP1表达略下调(P＜0.05)，VEGF mRNA和蛋白变化不显著。
　　结论：1.AQP1、AQP3在膝关节炎软骨组织水肿中，特别是水的转运过程起重要作用。2.西乐葆可抑制炎症因子表达，下调AQP1、AQP3表达量，减缓软骨基质蛋白多糖丢失，稳定软骨细胞，改善软骨基质病变。3.IL-1β干预SW1353细胞异常表达AQP1、AQP3，西乐葆可下调AQP1、AQP3表达以保持细胞存活率。

目录

摘要

1．1 骨关节炎

1．2 软骨组织

1．3 水与骨关节炎

1．4 水通道蛋白与骨关节炎

1．5 IL-1β与骨关节炎

1．6 西乐葆

参考文献

第二章 OA大鼠AQP1、AQP3的表达变化及Celebrex的干预作用

2．1 实验目的

2．2 实验材料

2．3 实验方法

2．4 结果

2．4 讨论

2．5 结论

参考文献

第三章 IL-1β诱导SW1353细胞AQP1、AQP3、VEGF表达变化及Celebrex的干预作用

3．1 实验目的

3．2 实验材料

3．3 实验方法

3．4 实验结果

3．4 讨论

3．5 结论

参考文献

第四章 结论

综述

缩写词简表

致谢

攻读学位期间成果

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