摘要
前言
材料与方法
1．1质粒、细胞系和菌株
1．2实验试剂
1．3实验耗材
1．4实验仪器
1．5引物设计
1．6溶液配制
1．7实验方法
1．7．3 MKN45和Mφ的共培养
1．7．4流式细胞术
1．7．5 MTT检测MKN45细胞增殖
1．7．6 ELISA试验细胞因子
1．7．7 BCA(Bicinchoninic Acid)蛋白浓度测定
1．7．8 Western Blot检测细胞蛋白表达水平
1．7．9人全长pCMV-Tag4-DLL3重组质粒瞬时转染MKN45细胞
1．7．10 G418筛选过表达稳定细胞株
1．7．11 DLL3-siRNA瞬时转染MKN45细胞
1．7．12全转录组测序
1．7．13细胞RNA的提取及逆转录
1．7．14 qRT-PCR检测人DLL3基因与IL-33基因在mRNA水平的表达
1．7．16 SDS-PAGE电泳
1．7．17免疫共沉淀和质谱分析
1．7．18 UCSC分析
1．7．19实验数据的统计学分析
结果
2．1 MKN45细胞和巨噬细胞共培养促进巨噬细胞向M2型极化
2．2 MKN45细胞和巨噬细胞共培养上清液促进MKN45细胞的增殖
2．3 MKN45细胞和巨噬细胞的共培养促进肿瘤微环境中IL-1β、IL-10和IL-12的分泌
2．4 MKN45细胞与Mφ共培养后DLL3的表达上调
2．5上调和下调MKN45细胞中DLL3的表达
2．6 DLL3促进MKN45细胞的增殖
2．7 MKN45细胞中DLL3的上调增加肿瘤微环境IL-10和IL-12的水平
2．8 MKN45细胞中DLL3的过表达上调IL-33
2．9 IL-33不影响Mφ分泌IL-10、IL-1β和IL-12
2．10 DLL3与LG3BP和HSPA8相互作用
2．11 UCSC分析高表达DLL3或IL-33的肿瘤患者具有较低的存活率
讨论
参考文献
攻读硕士期间成果
致谢
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