E.coli中高效表达外源蛋白的探索及其在纳豆激酶中的应用

摘要

目的：针对目前基因工程发酵生产中一些外源蛋白表达量过低的问题，寻找一种切实可行的方法能高效表达这些外源蛋白。目前基因工程发酵生产的方法一般是按照分子克隆的方法，将一段外源基因克隆到一种表达载体中，然后转化到大肠杆菌中进行发酵生产。但经常会出现表达量太低或者根本不表达的情况。尤其在大规模的工业化生产中，对于表达水平有较高要求，必须有高表达的菌株才能产生规模效益。对决定表达水平的一些重要因素以及相关的构建上的一些方法作一些研究，对于以研究为目的所需或者工业化生产各种外源蛋白，且对于继续探索在酵母细胞、哺乳动物细胞等真核细胞中高效表达外源蛋白都有十分重大的意义。材料和方法：以本所正在开发的产品——纳豆激酶作为试验对象来试验本课题中所研究的新方法的实用性。主要考虑两种因素：翻译起始区(TIR)的自由能及大肠杆菌的密码子偏好性。按照最大可能增大TIR区自由能和最大可能符合大肠杆菌密码子偏好性的原则，利用摇摆碱基的特性，对外源基因前35个碱基的一些摇摆碱基位点进行突变。G+C含量是决定TIR区标准自由能变化(△G~0)的决定性因素，降低G+C含量即可增大TIR区△G~0。

目录

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英文缩略语表

一、 前言

二、 实验设备及材料

三、 实验方法

四、 实验结果

五、 讨论

六、 实验结论及展望

七、 参考文献

在学期间论文及科研成果清单

致谢