人巨细胞病毒编码蛋白pUL23选择性调控干扰素γ刺激基因的表达

摘要

目的：人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）是一种典型的β疱疹病毒，在人群中广泛感染，HCMV UL23基因属于US22基因家族成员，它的编码产物pUL23大小约为33 kDa，为病毒皮层组分之一。实验室前期结果已经表明，pUL23能够抑制γ干扰素依赖的JAK/STAT1信号途径，抵抗干扰素抗病毒作用，γ干扰素途径调控着上千个基因，包括多种抗病毒基因的表达。本课题旨在探讨pUL23对干扰素刺激基因表达的影响，为阐明pUL23能够抵抗γ干扰素抗病毒的分子机理奠定基础。
　　方法：1）生物信息学方法预测受人巨细胞病毒调控的γ干扰素刺激基因，作为后续研究的候选基因。2）人巨细胞病毒Towne株和缺失UL23基因的Towne-delUL23病毒株分别感染HFF细胞，γ干扰素处理前后，采用q-PCR技术检测干扰素刺激基因的mRNA表达水平，分析病毒感染过程中pUL23对干扰素刺激基因表达的影响。
　　结果：1）NextBio平台筛选出9个受γ干扰素调控，基因表达增加改变倍数较大，并与巨细胞病毒感染相关的γ干扰素刺激基因，IFI44L、IFP35、NMI、IFIT3、STAT1、IRF1、IRF7、OAS1、SP110和1个对γ干扰素信号途径具有负调控作用的基因UBE2I，作为后续研究病毒蛋白pUL23调控的候选基因。2）Towne病毒感染组与Towne-delUL23病毒感染组相比，q-PCR实验数据表明①对于IFI44L、IFP35、NMI、STAT1基因，γ干扰素未处理时，pUL23对IFI44L、IFP35、NMI、STAT1基因的表达无显著性影响，γ干扰素处理后，pUL23抑制IFI44L、IFP35、NMI、STAT1基因mRNA表达；②对于OAS1、SP110基因，γ干扰素未处理时，pUL23促进OAS1、SP110基因mRNA表达，干扰素处理后，pUL23抑制SP110 mRNA表达，但是，pUL23或促进或抑制OAS1基因的表达；③对于IRF1基因，γ干扰素处理前后，pUL23均能抑制IRF1基因mRNA表达；④对于IRF7、IFIT3基因，γ干扰素未处理时，pUL23促进IRF7、IFIT3基因mRNA表达，然而γ干扰素处理后，pUL23对IRF7、IFIT3基因的表达无显著性影响；⑤对于UBE2I基因，γ干扰素处理前后，pUL23对UBE2I基因的表达均无显著性影响。
　　结论：人巨细胞病毒编码蛋白pUL23可以选择性调控干扰素刺激基因的表达，该研究为揭示pUL23在HCMV感染过程中的功能奠定了基础。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

第一章 前言

1.1人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus, HCMV）简介

1.2 HCMV UL23基因及其产物研究现状

1.3病毒与干扰素信号途径的相互作用

1.4研究目的和意义

1.5总体技术路线

第二章 生物信息学分析受人巨细胞病毒调控的干扰素刺激基因

2.1前言

2.2实验方法

2.3结果

2.4讨论

第三章 病毒感染过程中pUL23对干扰素刺激基因表达的影响

3.1前言

3.2实验仪器和材料

3.3.实验方法

3.4实验结果

3.5讨论

第四章 结论与展望

参考文献

附录

致谢