亚麻籽多糖的分离纯化、结构鉴定及其免疫调节活性和抗乙肝病毒活性分析

摘要

亚麻籽多糖类物质主要存在于亚麻籽壳中，含量随产地和品种不同而有所差异。本论文是从亚麻籽壳中分离纯化亚麻籽多糖，并对其进行结构鉴定和生物活性评价，主要研究结果如下：
　　以粉碎的亚麻籽为原料，采用甘油:乙醇体积比为15:4的混合溶液分离得到亚麻籽壳。再以亚麻籽壳为原料，经“水提醇沉法-Sevage法脱蛋白”得到亚麻籽粗多糖，得率为4.62％；再经“DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析”制备出亚麻籽中性多糖FP-1与酸性多糖FP-2，所得两组分分子量分别为2626 kDa和1182 kDa，FP-1和FP-2具有良好的热稳定性，在230℃以下热稳定性都很好。
　　元素分析结果表明FP-2与FP-1相比，与蛋白结合更为紧密，并且FP-2和FP-1含有一定的硫元素；IR分析表明FP-1和FP-2都具有多糖的特征吸收峰；刚果红实验结果表明FP-1与FP-2都有三螺旋高级结构，推测两者具有较好的生物活性。GC结果表明FP-1是由3.81%的L-鼠李糖、10.62%的L-阿拉伯糖、3.99%的L-岩藻糖、35.24%的D-木糖、0.2%的D-甘露糖、2.66%的D-葡萄糖和23.39%的D-半乳糖组成；FP-2是由11.27%的L-鼠李糖、4.03%的L-阿拉伯糖、2.82%的L-岩藻糖、7.12%的D-木糖、55.75%的D-半乳糖醛酸、2.99%的D-甘露糖、4.41%的D-葡萄糖、11.61%的D-半乳糖组成。
　　高碘酸氧化和Smith降解产物分析显示，FP-1有36.0%的1→、1→6糖苷键；47.5%的1→2或者1→4糖苷键；16.5%的1→3糖苷键连接。FP-2有27.2%的1→、1→6连接糖苷键；33.4%的1→2或者1→4糖苷键；39.4%的1→3连接糖苷键。甲基化分析结果表明FP-1主要是由→4)-Xyl-(1→、→2,3,4)-Xyl-(1→、Xyl-(1→和→3)Ara-(1→组成。FP-2主要是由→4)-Galp-(1→、→2,4)-Galp-(1→、→2)-Rhap-(1→和Glup-(1→组成。结合前面的化学分析法,核磁共振分析显示FP-1多糖主要是以1→4连接的D-木糖为主链，同时含有1→2,3,4，和1→连接糖苷键的木糖和较多1→3和1→连接的阿拉伯糖。FP-2多糖是以1→4连接的半乳糖为主链，同时含有1→2糖苷键的半乳糖，1→2糖苷键连接的鼠李糖。
　　亚麻籽多糖FP-1能显著提高小鼠巨噬细胞Raw264.7分泌TNF-a、IL-6、IL-12及NO的能力，同时能明显够降低HBsAg、HBeAg的表达和抑制乙肝病毒DNA的复制，说明FP-1具有显著的抗病毒活性和免疫调节功能。亚麻籽多糖FP-2对M1型和M2型巨噬细胞极化试验结果显示，巨噬细胞分别经LPS和IL-4刺激后，M1/M2平衡打破，开始向M1或者M2方向发展，中高剂量的FP-2组一定程度上既促进了诸多炎症因子IL-6、TNF-α和iNOS mRNA的分泌，又增加了抗炎因子IL-10和TGF-β的分泌，表明FP-2具有双向免疫调节功能。