筛选抗CXCR4的人源单链抗体及其体外抗肿瘤活性研究

摘要

目的：本论文利用酵母双杂交方法筛选抗CXCR4的人源单链抗体（Single chain variable fragment,scFv），并研究这些scFvs的体外抗肿瘤活性。 方法：（1）采用酵母双杂交方法筛选抗CXCR4的人源scFvs，并用大肠杆菌包涵体表达纯化的方法对筛选的scFvs进行表达纯化；（2）采用ELISA方法检测纯化的scFvs与抗原CXCR4的结合；（3）采用非竞争性ELIS A方法检测纯化的scFvs与抗原CXCR4的亲和力；（4）采用MTT方法检测纯化的scFvs对3种癌细胞株（DU145、PC3和MDA-MB-231）增殖的影响；（5）采用细胞划痕和Transwell迁移方法检测纯化的scFvs对这3种癌细胞迁移的影响；（6）采用Tra ns we ll侵袭方法检测纯化的scFvs对这3种癌细胞侵袭的影响；（7）采用流式细胞分析仪和Annexin V/PI双染检测纯化的scFvs对这3种癌细胞凋亡的影响。 结果：（1）采用酵母双杂交方法筛选单链抗体文库得到了3个阳性单链抗体克隆（aCX73，aCX82，aCX136），利用大肠杆菌包涵体表达纯化的方法成功地表达纯化了这3个scFvs；（2）采用ELISA方法检测表明3个纯化的scF vs能与抗原CXCR4结合；（3）采用非竞争性ELIS A方法检测表明3个纯化的scF vs（aCX73，aCX82，aCX136）与抗原CXCR4结合的KD值分别为266.4nM，120.65nM，296nM；（4）采用MTT方法检测表明3个纯化的scFvs对3种癌细胞株（DU145、PC3和MDA-MB-231）的增殖有抑制作用；（5）采用细胞划痕和Transwell迁移方法检测表明3个纯化的scF vs对这3种癌细胞的迁移有抑制作用；（6）采用Transwell侵袭方法检测表明3个纯化的scFvs对这3种癌细胞的侵袭有抑制作用；（7）采用流式细胞分析仪和Annexin V/PI双染检测表明3个纯化的scFvs对这3种癌细胞的凋亡有促进作用。 结论：利用酵母双杂交方法筛选单链抗体文库得到了3个抗CXCR4的scF vs，体外抗肿瘤活性研究发现这3个scF vs能抑制癌细胞株（DU145、PC3和MDA-M B-231）的增殖、转移和侵袭，并且能促进这3种癌细胞的凋亡，此研究为将这3个抗CXCR4的scF vs用于临床研究奠定了基础。

目录

声明

第一章 前沿

1 CXCR4的概述

2 以CXCR4为靶点的癌症治疗策略

3 单链抗体的概述

4 酵母双杂交概述

第二章 材料与方法

1实验材料

2 实验方法

1 单链抗体文库的筛选

2 单链抗体表达载体的构建

3 单链抗体表达载体的构建

4 单链抗体的表达和纯化

5 ELISA检测单链抗体和抗原CXCR4的结合

6 非竞争性ELIS A检测单链抗体和抗原CXCR4的亲和力

7 MTT方法检测单链抗体对癌细胞增殖能力的影响

8 细胞划痕方法检测单链抗体对癌细胞迁移的影响

9 Tra nswe ll迁移方法检测单链抗体对癌细胞迁移能力的影响

10 Tra nswe ll侵袭方法检测单链抗体对癌细胞侵袭能力的影响

11 流式细胞分析仪和Anne xin V/P I双染检测单链抗体对癌细胞凋亡的影响

第四章 讨论

第五章 实验结论与展望

1 实验结论

2 实验展望

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢