根癌农杆菌介导的MAPKK基因转化大岩桐的研究

摘要

促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)是生物体内信号转导途径的关键组分之一,已发现它组成的信号转导级联途径在植物中起着多方面的作用.用基因工程技术定向改良花卉品质,是当今花卉育种的重要内容.该研究用野生型、突变型MAPKK基因转化观赏花卉大岩桐,为进一步研究MAPKK基因的功能奠定基础,也为花卉植物的转基因提供实验系统.该研究构建了野生型、突变型MAPKK基因植物表达载体,并用冻溶法将其导入了根癌农杆菌LBA4404.载体构建的过程包括目的基因的PCR扩增、目的基因连接到pMD 18-T载体、目的基因连接到中间表达载体pIB1、目的基因及启动子、终止子连接到表达载体pBin19.最后得到的植物表达载体pBM含目的基因及植物选择标记基因NPTⅡ.以叶盘为外植体,初步建立了大岩桐的遗传转化体系.研究发现,卡那霉素(Kan)对大岩桐不定芽和不定根的诱导有较强的抑制作用,其选择浓度分别为50mg/L和10mg/L.头孢霉素(Ce)对大岩桐不定芽的诱导也有抑制作用,但较卡那霉素弱,其抑制农杆菌生长的适宜浓度为200mg/L.在所试验范围内,叶盘外植体的转化效率以预培养2天、共培养4天、菌液感染10min最高.100μmol/L的乙酰丁香酮(AS)可提高大岩桐的转化效率.用PCR法对转化再生植株进行了检测,证实NPTⅡ已经整合到大岩桐的基凶组DNA中.野生型、突变型MAPKK基因的转化效率分别为1.7％和0.7％.

目录

摘要

Abstract

缩略词(Abbreviations)

第一章研究概况

1.根癌农杆菌介导的植物遗传转化系统

1.1根癌农杆菌介导的遗传转化系统的优点

1.2影响根癌农杆菌介导的遗传转化效率的因素

2.MAPKK基因及其在植物中的功能

2.1 MAPKK及MAPKK基因

2.2 MAPKK在植物中的功能

2.3 MAPKK基因转基因研究进展

3.大岩桐组织培养和遗传转化研究进展

3.1大岩桐组织培养研究概况

3.2大岩桐遗传转化研究进展

4.本研究的目的意义

第二章野生型、突变型MAPKK基因植物表达载体的构建及工程菌种的制备

1.材料与方法

1.1野生型、突变型MAPKK基因植物表达载体的构建

1.2工程菌种的制备

2.结果与分析

2.1野生型、突变型MAPKK基因植物表达载体的构建

2.2根癌农杆菌LBA4404转化子的PCR鉴定和酶切鉴定

3.讨论

3.1野生型、突变型MAPKK基因植物表达载体的构建

3.2工程菌种的制备

第三章大岩桐遗传转化体系的建立及转化再生植株的鉴定

1.材料与方法

1.1大岩桐遗传转化体系的建立

1.2转化再生植株的检测

2.结果与分析

2.1大岩桐遗传转化体系的建立

2.2转化再生植株的PCR检测

3.讨论

3.1大岩桐遗传转化体系的建立

3.2转化再生植株的PCR检测

小 结

参考文献

图 版

攻读硕士学位论文期间发表的文章

致 谢

硕士学位论文授权书