沃尼妙林衍生物(Ⅵ)的体内外抗菌活性及体外代谢研究

摘要

本文评价了一种沃尼妙林衍生物（VI）的体内外抗菌活性，并对其体外代谢进行了初步研究。
　　采用微量肉汤稀释法测定衍生物（VI）对6株金黄色葡萄球菌菌株、7株大肠杆菌菌株、3株链球菌菌株及鸡毒支原体的最低抑菌浓度（MIC），结果显示：衍生物（VI）对6株金黄色葡萄球菌的敏感度最高，最小抑菌浓度（MIC）范围为0.003~0.007μg/mL；对3株链球菌菌株的最小抑菌浓度（MIC）范围为0.0156~0.03μg/mL；衍生物（VI）对鸡毒支原体的最小抑菌浓度（MIC）为0.008μg/mL；对7株大肠杆菌菌株的最小抑菌浓度（MIC）范围为4~32μg/mL。衍生（VI）对金黄色葡萄球菌、链球菌体外抗菌活性优良，抑菌效果均优于对照药盐酸沃尼妙林组（M IC值范围分别为0.03~1μg/mL及0.025~0.03μg/mL）；对鸡毒支原体的体外抑菌活性效果与沃尼妙林（MIC值均为0.008μg/mL）相当。
　　建立了中性粒细胞减少症小鼠大腿感染金黄色葡萄球菌模型及小鼠感染链球菌模型，在此模型基础上评价衍生物（VI）对金黄色葡萄球菌ATCC25923及链球菌CICC10373的抗菌效果。结果表明，衍生物VI在小鼠体内对金黄色葡萄球菌的抑菌效果明显（与空白对照组相比，p<0.01），抑菌效果与沃尼妙林相当（P>0.05）；衍生物 VI对链球菌的抑菌效果优良（与空白对照组相比，P<0.01），抑菌活性与沃尼妙林相当（P>0.05）。
　　建立了衍生物 VI及沃尼妙林在人工胃液、人工肠液及肝脏匀浆液中高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。衍生物VI及沃尼妙林在人工胃液、人工肠液、肝脏匀浆液中的检测限(LOD)均为2ng/mL，定量限(LOQ)为5ng/mL；衍生物（VI）在三种生物基质中的回收率为89.2%~97.3%，批内变异系数和批间变异系数均低于11%，化合物沃尼妙林在三种样品中的相对回收率为86.4%~95.9%，批内变异系数和批间变异系数均低于10%。该方法稳定、灵敏度和准确度高、重复性好，符合样品检测要求。
　　采用高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）检测方法研究了沃尼妙林衍生物VI的体外代谢情况。结果显示，衍生物V I在肝脏匀浆液中的含量未有明显变化；在人工胃液及人工肠液中，衍生物VI的含量均有下降，且检测到沃尼妙林的产生。经过计算，衍生物VI在人工胃液及人工肠液中孵育12 h后代谢率达78.4%及72.2%。

目录

声明

英文缩略词

1引言

1.1沃尼妙林研究进展

1.1.1 沃尼妙林毒理学研究

1.1.2 沃尼妙林抗菌活性研究

1.1.3 沃尼妙林药代动力学研究

1.1.4 沃尼妙林衍生物研究进展

1. 2 研究目的与意义

2. 1 材料

2.1.1 仪器与设备

2.1.2 药品与试剂

2. 2 沃尼妙林衍生物（ VI）的体外抑菌活性

2.2.1 溶液配制

2.2.2 受试菌株

2.2.3 菌株复苏与菌液制备

2.2.4 最小抑菌浓度（MIC）的测定

2. 3 沃尼妙林衍生物（ VI）的体内抗菌活性

2.3.1 溶液配制

2.3.2 受试菌株

2.3.3 小鼠中性粒细胞减少症模型

2.3.4 菌落计数

2.3.5 受试菌株在MH肉汤中生长曲线的绘制

2.3.6 小鼠大腿感染金黄色葡萄球菌模型

2.3.7 小鼠感染链球菌模型

2.3.8 衍生物（VI）在小鼠体内对金黄色葡萄球菌的抗菌活性

2.3.9 衍生物（VI）在小鼠体内对链球菌的抗菌活性

2.3.10 数据统计分析

2. 4 沃尼妙林衍生物（ VI）的体外代谢研究

2.4.1 溶液配制

2.4.2 生物基质的配制

2.4.3 沃尼妙林及其衍生物（VI） HPLC-MS/MS测定方法

2.4.4 体外代谢研究

3实验结果

3. 1沃尼妙林衍生物（ VI）的体外抑菌活性

3. 2 沃尼妙林衍生物（ VI）的体内抗菌活性

3.2.1 小鼠中性粒细胞减少症模型

3.2.2 受试菌株在MH肉汤中生长曲线的绘制

3.2.3 小鼠大腿感染金黄色葡萄球菌模型的建立

3.2.4 小鼠感染链球菌模型的建立

3.2.5 衍生物（VI）对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性

3.2.6 衍生物（VI）对链球菌的体内抗菌活性

3. 3 沃尼妙林衍生物（ VI）的体外代谢研究

3.3.1沃尼妙林及其衍生物（VI）的HPLC测定方法建立

3.3.2 衍生物VI的体外代谢研究

4讨论

4. 1 沃尼妙林衍生物（ VI）的体外抑菌活性

4. 2 沃尼妙林衍生物（ VI）的体内抗菌活性

4.2.1 小鼠感染模型的建立

4.2.2 衍生物（VI）的体内抗菌活性

4. 3 沃尼妙林衍生物（ VI）的体外代谢研究

4.3.1 样品的处理与检测方法

4.3.2 生物基质的选择

4.3.3 体外代谢研究

全文总结

致谢

参考文献