原花青素A2肠道菌群代谢物及其对巨噬细胞泡沫化的影响

摘要

荔枝果皮富含原花青素 A2（ PCA2）且具有显著的抗动脉粥样硬化（ AS）活性，而 PCA2难于消化吸收。研究发现，原花青素的肠道菌群代谢物可能在其生物活性发挥过程中起着重要的作用。本文采用 UPLC-Q-TOF-MS对荔枝果皮 PCA2肠道菌群代谢物进行了分析，采用ox-LDL刺激的巨噬细胞泡沫化模型研究了PCA2肠道菌群代谢物对巨噬细胞泡沫化的影响。主要研究结果如下：
　　（1）荔枝果皮PCA2的分离纯化
　　采用醇提法得到荔枝果皮原花青素粗提物，经AB-8大孔树脂分离后得到4个级分，进一步利用制备型 HPLC纯化。采用紫外和红外光谱、高效液相色谱（HPLC）和液质联用（UPLC-Q-TOF-MS）分析PCA2，获得纯度为94.08%的PCA2。
　　（2）PCA2肠道菌群代谢物
　　采用总抗氧化能力（T-AOC）、ORAC、DPPH?和 ABTS?清除能力评价了PCA2不同代谢时间点的抗氧化能力。结果显示，与0 h相比，PCA2与肠道菌群体外共培养6h后，其在四个体系中的抗氧化活性均有不同程度的增加，其中 T-AOC、清除DPPH?及ABTS?能力分别显著提高2.01、2.16及1.34倍；HPLC的结果显示，随着肠道菌群孵育时间的延长， PC A2被菌群代谢后主要产生8个新组分，经 UPLC-Q-TOF-MS分析确定组分1、2、3、4和6分别为对羟苯基乙酸（4-HPAA）、表儿茶素、3-(4-羟苯基)丙酸（HPPA）、B型原花青素、5.7.2＇-三羟基黄烷，组分5、7和8为未知结构化合物。
　　（3）PCA2肠道菌群代谢物HPPA、4-HP AA对巨噬细胞泡沫化的影响
　　采用80μg/mL的ox-LDL孵育 RAW264.7巨噬细胞24 h构建泡沫细胞模型。油红 O-苏木素染色结果显示，泡沫细胞模型组细胞内大量脂滴蓄积，少量细胞破裂且脂滴外溢。PCA2肠道菌群代谢物HPPA和4-HPAA组细胞内染红程度明显降低，脂滴明显减少。胆固醇含量测定结果显示，与泡沫细胞模型组相比，12.5μg/mL的HPPA和4-HPAA均能显著降低细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）、胆固醇酯（CE）含量及CE/TC值（P﹤0.05），其中 CE/TC值分别比泡沫细胞模型组降低21.63%和27.64%。RT-PCR结果显示，与泡沫细胞模型组相比，HPPA显著上调ABCA1、S R-B1 mRNA的表达水平，分别为泡沫细胞模型组的2.13、2.10倍(P﹤0.05)；4-HPAA显著上调PPARγ、ABCG1 mRN A的表达水平，分别为泡沫细胞模型组的2.02、2.44倍（P﹤0.05）。
　　以上结果表明， PCA2经肠道菌群代谢产生4-HPAA、表儿茶素、HPPA、B型原花青素和5.7.2＇-三羟基黄烷等化合物；代谢物 HPPA、4-HPAA通过上调 SR-B1、PPARγ、ABCA1、ABCG1等胆固醇转运功能基因的表达，进而降低ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化程度，PCA2肠道菌群代谢物可能在PCA2抗 AS活性过程中发挥着重要的作用。

目录

声明

英文缩略词

1前言

1. 1原花青素研究现状

1. 2原花青素肠道菌群代谢研究现状

1. 3动脉粥样硬化的研究现状

1. 4研究内容

1. 5研究目的和意义

2.1实验材料

2.2主要仪器设备

2. 3主要试剂及配制

2. 4实验方法

2. 5统计学分析

3实验结果

3. 1原花青素A2的提取和分离纯化

3. 2原花青素A2体外肠道菌群代谢

3. 3原花青素A2肠道菌群代谢物对巨噬细胞泡沫化的影响

4. 1讨论

4. 2结论

4. 3创新点

4. 4展望

致谢

参考文献