华南及周边地区PRRSV流行病学调查及N、Nsp9、CD163受体蛋白免疫原性研究

摘要

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征并病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus， PRRS V）引起的母猪繁殖失败以及仔猪呼吸困难的传染性疾病，是对全球养猪业危害最大的疾病之一，每年造成的经济损失不可估量。本篇论文调查和研究的内容主要分为以下几个部分。
　　1.华南及其周边地区PRRS V流行病学调查及ORF5和Nsp2基因遗传进化分析。
　　通过对2015-2016年华南及其周边地区PRRS V血清学及其分子学流行学状况调查分析，结果显示华南及其周边地区的猪群PRRSV抗体阳性率大体高于60%，抗体阳性率最高的省份是福建省（96.3％），最低是湖北省（58.82％），其中在广东省检测的4995份血清中，阳性血清有4125份，阳性率为82.58％。不同阶段猪的P RRS V抗体阳性率没有明显差异，其中阳性率最高的是保育猪（24-60日龄），阳性率最低的是仔猪（1-24日龄）。通过统计华南地区不同月份抗体阳性率，发现不同月份的抗体阳性率水平较高，都在70％以上。在对PRRSV的抗原检测时发现，华南地区不同月份的抗原检测结果都有阳性，但抗原阳性率有所差异，其中2月抗原阳性率最低（10％），8月抗原阳性率最高（65％）。
　　在华南地区PRRSV基因的遗传进化分析方面，本实验测得14个毒株的ORF5和Nsp2基因与欧洲流行的PRRSV毒株基因同源性较低，与北美洲、韩国和泰国流行的毒株基因同源性较高，与国内流行的PRRSV毒株基因同源性最高，例如与JXA1毒株同源性高达99.7％。在氨基酸序列分析方面，ORF5氨基酸保守度较高；Nsp2氨基酸突变较多，其中GDGZ和GDHY毒株在第249-260氨基酸位置存在11个氨基酸的缺失。
　　2. PRRSV的N、Nsp9和CD163受体蛋白免疫原性研究。
　　本试验表达并纯化了PRRSV的N、Nsp9和CD163蛋白，用3种蛋白分别免疫小鼠，获得小鼠抗N、Nsp9和CD163蛋白的高免血清，随后通过间接免疫荧光实验在细胞水平上分别检测了3种高免血清的免疫原性，测试抗N、Nsp9、CD163蛋白的3种高免血清能否抑制P RRS V在M ARC-145细胞上的复制与增殖。试验结果显示抗N蛋白的高免血清没有明显抑制PRRSV在MARC-145细胞上增殖的效果，而抗Nsp9和抗CD163蛋白的高免血清可以显著抑制PRRSV在MARC-145细胞上的增殖；抗Nsp9蛋白的高免血清在4倍稀释时仍然可以抑制PRRSV在MARC-145细胞上的增殖，而抗CD163蛋白的高免血清活性更强，在稀释8倍时仍具有抑制作用。

目录

声明

缩略语及英汉对照表

1前言

1. 1猪繁殖与呼吸综合征概述

1. 2 猪繁殖与呼吸综合征的病原和致病机理研究进展

1.2.1 病原学特性

1.2.2基因组结构

1.2.3 PRRS V编码的结构蛋白

1.2.4 PRRS V编码的非结构蛋白

1.2.5PRRSV 的致病机理

1.2.5 PRRS V的细胞受体

1. 3 猪繁殖与呼吸综合征的流行病学

1.3.1易感动物与传播途径

1.3.2临床症状

1. 4猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法

1.4.1血清学诊断方法

1.4.2分子生物学诊断方法

1.4.3病毒的分离鉴定

1. 5猪繁殖与呼吸综合征的防控

1.5.1加强引种工作的管理

1.5.2建立生物安全体系

1.5.3加强饲养管理

1.5.4做好免疫与检测

1.5.5减少继发感染

1.5.6减少应激

1. 6 本研究的目的和意义

2材料与方法

2. 1 供试材料

2.1.1细胞、病毒与血清

2.1.2质粒、菌种和试验动物

2.1.3培养基

2.1.4实验主要试剂与试剂盒

2.1.5实验主要仪器

2.1.6相关溶剂的配制

2.1.7用于本研究的PRRSV 毒株基因组序列

2.1.8 分子生物学分析软件

2. 2研究方法

2.2.1流行病学调查

2.2.2PRRSV、N、NSP9、CD163免疫原性研究

3. 1流行病学调查结果

3.1.1 PRRS V抗体检测结果

3.1.2 PRRS V抗原检测结果

3. 2N、Ns p 9、C D163受体蛋白表达

3.2.1 N、Nsp9及CD163的扩增

3.2.2 重组质粒的双酶切鉴定

3.2.3 蛋白的表达与纯化

3.2.4 试验小鼠血清抗检测结果

3.2.5 血清抗PRRS V结果

4 讨论

4. 1 流行病学调查

4.2 N、Nsp9、CD163蛋白免疫原性研究

5 全文总结

致谢

参考文献