布鲁氏菌单克隆抗体制备及抗原蛋白的初步鉴定

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摘 要

Preparation of Monoclonal Antibody against Brucella and Preliminary Identification of the Antigen

1 引言

1.1 布鲁氏菌病概述

1.1.2 布鲁氏菌流行病学

1.2 布鲁氏菌检测技术

1.2.1 细菌学检测

1.2.2 分子生物学检测

1.2.3 血清学检测

1.3 目的意义

2 材料

2.1 实验动物

2.2 菌株

2.3 细胞株

2.4 表达载体

2.5 仪器设备

2.6 主要耗材

2.7 主要试剂

2.7.1 单克隆抗体制备主要试剂

2.7.2 酶联免疫吸附试验主要试剂

2.7.3 分子克隆主要试剂

2.7.4 蛋白鉴定、纯化主要试剂

2.8 生物信息学软件

3.1 单克隆抗体制备

3.1.1 免疫用抗原制备

3.1.2 动物免疫

3.1.4 杂交瘤细胞株建立

3.1.5 单克隆抗体特异性鉴定

3.1.6 单抗亚型的鉴定

3.1.7 单克隆抗体腹水制备

3.1.8 腹水中单克隆抗体的纯化

3.2 双向电泳

3.2.2 等电聚焦

3.2.3 聚丙烯酰氨凝胶电泳

3.3 蛋白质免疫印迹鉴定

3.4 质谱鉴定

3.5 蛋白的原核表达及鉴定

3.5.1 蛋白序列获取及引物合成

3.5.2 目的片段扩增

3.5.3 PCR产物回收及纯化

3.5.4 双酶切

3.5.5 连接

3.5.6 感受态细胞制备

3.5.7 转化

3.5.8 蛋白诱导表达及鉴定

3.5.9 包涵体蛋白纯化

3.5.10 目的蛋白纯化效果鉴定

3.6 抗原蛋白鉴定

4 结果

4.1 小鼠血清效价测定结果

4.2 单克隆抗体筛选情况

4.3 单克隆抗体特异性鉴定结果

4.4 抗体亚型鉴定结果

4.5 单克隆抗体腹水纯化结果

4.6 样品蛋白浓度测定结果

4.7 抗原蛋白反应性验证结果

4.8 抗原蛋白选定情况

4.9 抗原蛋白的质谱分析结果

4.10 预测蛋白的原核表达

4.10.1 引物设计

4.10.2 PCR扩增结果

4.10.3 原核表达载体构建结果

4.10.4 原核表达结果

4.10.5 原核表达蛋白的纯化结果

4.11 特异性抗原蛋白验证结果

5 讨论

5.1 细胞与动物选择

5.2 动物免疫

5.3 细胞筛选

5.4 双向电泳及质谱鉴定

5.5 预测蛋白验证

6 结论

致 谢

参 考 文 献