肉鸡组织中氟喹诺酮类抗生素快速检测的胶体金技术研究

摘要

目前，氟喹诺酮类药物残留的检测方法需要严格的实验室环境、较高的硬件配置、高素质的操作人员、检测时间长、成本高，不适用于大量样品的筛选，也难在基层检测单位以及食品企业推广使用。本研究选择具有氟喹诺酮类药物母核结构共性特征的环丙沙星(CPFX)为半抗原，将单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术引入到氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究之中，建立了一种操作简单、检测快速、敏感性高、特异性和广谱性强的氟喹诺酮类药物残留免疫学检测方法，为临床氟喹诺酮类抗生素残留的快速检测和大量样品的筛选，动物性食品生产过程控制、企业自检等提供了一种简单、快速、灵敏、方便、可靠的现场检测技术。并对河北及周边地区肉鸡样品进行了氟喹诺酮类药物残留的检测与分析，掌握了河北及周边地区肉鸡样品中氟喹诺酮类药物残留现状，为氟喹诺酮类抗生素残留的监控检测提供技术支持。
　　将具有氟喹诺酮类药物母核结构共性特征的环丙沙星(CPFX)与载体蛋白(BSA)偶联，制备人工抗原CPFX-BSA，免疫6周龄BALB/c雌性小鼠，筛选得到广谱性、敏感性最好4H8单克隆抗体，将4H8单克隆抗体纯化后标记胶体金颗粒作为金标垫，分别以CPFX-BSA偶联蛋白和兔抗鼠IgG作为检测线和质控线，组装了检测氟喹诺酮类抗生素残留的胶体金免疫层析试纸条。该试纸条肉眼于10min内即可判定结果，用于检测10种氟喹诺酮类抗生素均显示为阳性，而检测4种其它常见药物均显示为阴性，表明该试纸条对10种氟喹诺酮类抗生素均有较好的检测特异性。对环丙沙星、培氟沙星、达氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星的检测限为3.2μg/kg，对沙拉沙星、双氟沙星、麻保沙星的检测限为6.4μg/kg。稳定性试验表明在37℃条件下试纸条可稳定保存60d，在4℃条件下可稳定保存360d。采用本研究研制的试纸条检测河北省及周边地区的鸡肉样品3414份，平均阳性检出率为0.76％，其中屠宰场、超市、活禽市场的平均阳性检出率分别为0.38％、0.09％、2.19％，检测结果与ELIAS法比对一致。表明本研究研制的胶体金免疫层析试纸条可用于氟喹诺酮类药物残留的快速筛选检测，方便在基层推广应用。

目录

声明

摘要

1．1 氟喹诺酮类药物概述

1．2 兽药滥用的危害性及防控措施

1．3 氟喹诺酮类药物残留检测方法概述

1．4 胶体金技术及其在兽医领域中的应用

1．5 本研究的目的与意义

第2章 氟喹诺酮类抗生素广谱特异性单克隆抗体的制备与鉴定

2．1 材料与方法

2．2 结果与分析

2．3 讨论

2．4 小结

第3章 氟喹诺酮类抗生素胶体金免疫层析试纸条的制备

3．1 材料和方法

3．2 结果与分析

3．3 讨论

3．4 小结

第4章 肉鸡组织中氟喹诺酮类抗生素残留的检测与分析

4．1 材料和方法

4．2 结果与分析

4．3 讨论

4．4 小结

结论

参考文献

致谢

作者简介

攻读硕士学位期间发表的论文及成果