降血压肽口服微球缓释制剂的工艺研究与优化

摘要

降血压肽(AHP)是一类能够降低人体血压的小分子多肽，它通过抑制肾素-血管紧张素系统( RAS)中血管紧张素转换酶(ACE)活性而降低血压。AHP来源于天然动、植物及微生物，具有降血压效果明显，无毒副作用等优点，已成为目前抗高血压药物研究的热点之一。本课题组利用基因工程技术高效表达出的AHP(序列号为VLPVPR)，体内外降压效果好，但口服不易吸收，生物利用度在10％以下，且血药浓度呈现明显的“峰谷”波动，不利于高血压患者的平稳降压。为了充分发挥该肽良好的降压效果，本文采用新型制剂技术，开发研制降血压肽口服微球缓释制剂。
　　 本文首先研究了该肽在体内外的降压效果，发现其对ACE的抑制效果很好，其IC50为4.1μmol/L；对高血压大鼠降压显著，中剂量给药后降压幅度最大达到-26.29±11.82mmHg，高剂量给药后降压幅度最大达到-43.16±12.55 mmHg，但是，药效维持时间不长，给药2h后，大鼠血压开始恢复，12 h大鼠血压基本恢复正常。
　　 然后本文研究了该肽的理化性质和稳定性，不同浓度样品溶液在37℃下静置24 h，其损失率在0.1-0.3％之间；同一浓度的样品溶液在25～100℃之间处理4h后，其损失率在0.2-0.9％之间，其对ACE的抑制活性基本不变，抑制率都在93-95％之间；同一浓度的样品溶液在pH1～10条件下处理4h后，其损失率在0.1-0.3％之间，对ACE的抑制活性基本不变，都在±1％之间，这说明该肽自身较稳定，耐热性好，耐酸碱能力强，因此，本文选取复乳液中干燥法制备缓释微球。
　　 通过正交优化，得到了微球制备的最佳工艺条件，即油相中CPLGA为12％、初乳Vstir为800 r/min、内水相与油相体积比Rw/o为1/10以及外水相CPVA为4％时，所得微球的综合评价指标S最大；微球制备过程中各因素影响大小顺序为：D>C>A>B；所得微球包封率都在90％以上，载药量在2％左右，平均粒径在75-85 um之间，微球回收率在85％以上。在此基础上，分别制备了载药微球和空白微球，通过电子扫描显微镜观察微球表征；通过体外释放实验发现，载药微球突释小，2h内的突释量均在40％以内，符合药典规定；48 h内的累积释药率均在90％以上，符合药典规定：释药曲线采用零级动力学方程、一级动力学方程和Higuchi方程这三种模型进行拟合，选取相关系数(r)最大而均方误差(MSE)最小的拟合结果，发现最符合Higuchi方程，这说明载药微球的缓释是通过扩散机制控制的。
　　 该研究开发的降血压肽口服微球缓释制剂，成功解决了降血压肽口服吸收差、体内药物浓度波动大，降压效果平稳性差等缺点。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 绪论

1.1 高血压概述

1.1.1 高血压概念与分类

1.1.2 高血压的危害

1.1.3 高血压的发病机制

1.1.4 高血压的治疗方法

1.2 抗高血压药物的研究进展

1.2.1 抗高血压药物

1.2.2 降血压肽药物及其来源

1.3 微球制备研究进展

1.3.1 微球的制备

1.3.2 药用辅料

1.4 本研究的主要内容和意义

1.4.1 本研究的主要内容

1.4.2 本研究的意义

第二章 降血压肽的体内外药效试验

2.1 实验材料

2.2 主要仪器设备

2.3 实验方法

2.3.1 VLPVPR对ACE的体外抑制活性测定

2.3.2 VLPVPR体内降压效果试验

2.4 数据处理

2.5 结果与讨论

2.5.1 马尿酸标准曲线

2.5.2 重组降血压肽的IC50测定结果

2.5.3 重组降血压肽抑制动力学方程

2.5.4 重组降血压肽降血压效果

2.6 本章小结

第三章 降血压肽的稳定性研究

3.1 实验材料

3.2 主要仪器设备

3.3 实验方法

3.3.1 VLPVPR检测方法的验证

3.3.2 VLPVPR稳定性研究

3.3.3 体外抑制活性变化

3.4 结果与讨论

3.4.1 VLPVPR检测方法的验证

3.4.2 VLPVPR稳定性研究

3.4.3 体外抑制活性

3.5 本章小结

第四章 微球制备的工艺研究与优化

4.1 实验材料

4.2 主要仪器设备

4.3 实验方法

4.3.1 初乳的制备研究

4.3.2 复乳的制备研究

4.3.3 微球制备的预实验

4.3.4 微球制备的正交试验

4.3.5 载药微球的检测

4.4 结果与讨论

4.4.1 VLPVPR的标准曲线

4.4.2 微球载药量计算的校准曲线

4.4.3 载药微球的综合评价指标

4.5 小结

第五章 微球的体外释放特性研究

5.1 实验材料

5.2 主要仪器设备

5.3 实验方法

5.3.1 载药微球的制备

5.3.2 标准曲线的绘制

5.3.3 载药微球体外释放特性研究

5.4 结果与讨论

5.4.1 载药微球的特性

5.4.2 VLPVPR标准曲线

5.4.3 载药微球的体外释放情况

5.5 小结

结论与展望

参考文献

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢