龟鹿二仙膏补肾抗衰的实验研究及“气助阴生阳长”的理论探讨

摘要

衰老是机体在发育成熟后，体内各种功能活动进行性下降的过程，它是一种复杂的生命现象。随着全球老龄化趋向的渐演渐烈，以及生活水平的不断提高，人们对防治衰老，延年益寿，提高生命活力和生活质量有迫切的要求，因此，对衰老本身及伴随这一过程所出现的一系列机体各个功能层面的下降和疾病的产生，就日益为广大中外学者所关注。就目前而言，关于衰老的发生机制，仍说法不一，有中毒学说、内分泌学说、大脑伤害学说、蛋白质变性学说、遗传学说、程序衰老学说及免疫学说等多种。尽管伴随衰老机制研究的日渐深入，其相应的干预药物亦层出不穷，但在实际临床应用中尚缺乏疗效明确而稳定的药物。常用的西药如维生素类、褪黑激素等存在疗效不够确切和副作用的问题，在临床应用中受到极大限制，具有悠久历史和独特理论体系的中医中药在抗衰老方面受到越来越多的关注。 祖国医学认为五脏虚损尤其是肾衰是衰老的主要生理特征，也是导致衰老的重要原因。五脏虚损日久则累及于肾，肾虚主要包括肾气和肾中阴阳的虚损，肾虚又导致痰、瘀等病理产物滋生，以至虚实夹杂，变生他病，加速衰老。因此，衰老以虚为本，以实为标。肾衰是衰老的主因，血瘀则是导致衰老的促进因素。因此，本研究从补肾为主，兼以益气对促进阴阳化生和血液运行的角度立法选定方药开展研究。 通过对文献的复习，我们发现在中医药抗衰老研究中，补肾法为抗衰老研究中的一支生力军，其中尤以六味地黄丸、肾气丸、左归丸、右归丸等系列组方为研究重点，大量学者从药理药效方面开展了原方或拆方的研究，并深入到分子和基因水平进行了探讨。初步证明了补肾法是有效的抗衰老途径之一。而分析上述方剂的配方特点，我们不难发现它们的共性，即1)全部由植物药组成，2)方中均含有补和泻的成分。 与之相比，龟鹿二仙膏的研究相对较少，且研究集中在功效方面为主，较少系统深入的药理探讨。该方的组方特点与上述补肾方不同：1)以“血肉有情之品”为主药，峻补阴阳，2)全方兼顾补益气血阴阳，纯补而无泻。因此选定龟鹿二仙膏作为本课题的研究方向。 龟鹿二仙膏首见于《医方考·虚损劳瘵门》，由鹿角胶、龟板、枸杞子、人参四味组成(本研究以党参代人参)，合方精当。方中以“得天地之阳气最全，善通督脉”之鹿角功壮肾阳，化生精血；“得天地之阴气最厚，善通任脉”之龟板滋阴潜阳，兼能补血；二药合为主药，体现“二物气血之属，又得造化之玄微，异类有情”要义。又以“善于固气”之党参补益元气而生津；“善于滋阴”之枸杞子益精生血。四药合用，性味平和，入五脏而以肝肾为主，又善通奇经之任、督，生精、益气、养血，阴阳并补，且补阴无凝滞之弊，补阳而无燥热之害。本方乃治疗虚证劳损之基本方，文献记载具有防病延年的良好作用。在既往临床和实验研究中本方均表现出良好的补肾阴、壮肾阳、益气血、抗辐射、抗衰老等多种作用，能显著提高细胞和体液免疫功能，且本方组方独具特色，以两味“血肉有情之品”鹿角和龟板为主药组方，有别于六味地黄丸，肾气丸，左归丸，右归丸等由植物药组成经典补肾方。为了进一步确证其抗衰老层面的治疗效果，探讨其可能的效应机理，与此同时，本研究试图通过原方与去党参方的比较来探求“气与阴阳”的中医理论，我们开展了本课题的研究。 动物模型方面我们选取了经典的D-半乳糖衰老模型，同时将实验动物随机分为正常组、模型组、龟鹿二仙膏高(15g成品/kg)、中(10g成品/kg)、低(5g/kg)剂量、龟鹿二仙膏去党参组共六组做比照观察。在实验方面选取了与衰老相关的系列指标。 ①龟鹿二仙膏对自由基的影响：龟鹿二仙膏各组可明显提高小鼠血清和大鼠线粒体中SOD、GSH、CAT等指标的活性水平，并使MDA含量显著降低，从而提高了机体的自由基清除能力，降低了脂质过氧化物反应，阻滞了生物分子间的交联反应，同时本方还可以明显改善由于自由基损伤所引发的机体血粘度升高，红细胞变形能力的下降等血液动力学改变状态，故推测龟鹿二仙膏可能是通过提高清除自由基的能力，延缓线粒体老化并改善机体微循环障碍而起到抗衰老作用。 ②龟鹿二仙膏对免疫功能的影响：结果显示龟鹿二仙膏能够促进腹腔巨噬细胞吞噬功能、促进脾淋巴细胞增殖效应并增强IL-2活性，与模型组比较有显著意义。说明龟鹿二仙膏可以通过增加腹腔巨噬细胞吞噬功能，提高胸腺指数和脾淋巴细胞增殖能力，同时增强IL-2的活性水平以增强机体免疫力，以调节机体免疫应答，抵抗不良刺激，改善虚弱状态，从而发挥抗衰老作用。此外，中药组可明显降低实验动物iNOS的基因表达水平，但对IL-6没有显著意义，提示我们龟鹿二仙膏阻抗衰老的机制可能主要与抑制和预防NO诱导的氧化应激反应有关，而对抑制炎症因子的始动作用、干预自身损伤方面的作用不明显。 ③龟鹿二仙膏对小鼠原代培养脾淋巴细胞DNA氧化损伤的影响：H2O2可致原代培养的脾淋巴细胞的DNA严重损伤，而龟鹿二仙膏各组均能不同程度地降低其损伤效应，并且随着药物浓度地增加，抗损伤作用亦逐渐增强，呈现一定的剂量效应关系。而去党参组对DNA损伤的抑制作用弱于中、高剂量组，与低剂量组相当。结果表明，龟鹿二仙膏具有良好的抗DNA损伤作用，去党参后则效果明显减弱。 ④龟鹿二仙膏对衰老大鼠垂体细胞增殖的影响：龟鹿二仙膏中、高剂量组均可使垂体细胞3H-酪氨酸掺入量均不同程度增高，提示我们，龟鹿二仙膏可能通过垂体-性腺轴作用，增强垂体细胞转化能力，进而调节皮质类固醇激素的含量，这可能是其抗衰老的途径之一。 综合本研究各项结果，我们认为龟鹿二仙膏具有良好的抗衰老治疗效果，其效用机制可能一方面抗氧自由基损伤，增强免疫功能直接有关，另一方面又可能通过抗细胞DNA氧化损伤，增强垂体—性腺轴功能等途径来达到抗衰老的综合效能。这一结果，与本方补肾和血，并益阴阳之功甚合。而以阴生阳长，气固血充，更能化现祖国医药学阴阳互根之奥妙所在，同时也进一步证明了本方补肾抗衰的有效性和科学性。 同时，我们还发现龟鹿二仙膏去党参组在抗氧化自由基、降低DNA损伤，改善机体垂体—性腺轴功能等方面与模型组比较虽然具有显著意义，但其作用强度明显减弱，与低剂量组相当；而在血液流变学和免疫功能的实验中，则去党参组与模型组比较无明显差异。这与缺乏党参的补气之源不无关系。这一结果也从反面印证了气对阴阳和血的化生与运行具有促进作用，初步从实验角度证明了中医“气助阴生阳长”理论的科学性。

目录

文摘

英文文摘

广州中医药大学学位论文原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

引言

第一章文献研究

第二章实验研究

第三章结论与展望

参考文献

致谢