胃炎Ⅰ号对大鼠胃癌前病变组织基质金属蛋白酶-7,9调控机制的研究

摘要

研究背景：
　　胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，位居全球肿瘤发病率和癌症病死率的第二位，严重威胁着人类的健康。然而其病因病机尚不明确，无法进行针对病因的一级预防,但胃粘膜的癌变往往经历较长的癌前病变阶段,呈现慢性浅表性胃炎－慢性萎缩性胃炎－肠上皮化生－不典型增生－癌变的趋势。其中，不典型增生和肠上皮化生被称为癌前病变。因此，针对癌前病变的二级预防是防治胃癌的关键。如果能在胃癌前病变阶段及早诊断，及早治疗，则能极大的降低胃癌的死亡率。中医药在防治胃癌前病变方面展示出独特的优势。胃炎I号是导师刘友章教授根据中医脾胃为后天之本，气血生化之源的理论，结合临床，创制的纯中药复方。在临床应用中取得了很好的疗效。前期研究已初步证实了胃炎I号对脾胃虚弱型慢性萎缩性(CAG)胃炎病人和CAG模型大鼠胃粘膜修复有很好的疗效，并有一定的抗肠上皮化生的作用。本课题拟研究胃炎I号治疗胃癌前病变可能的作用机制。近年来许多研究证实胃癌中基质金属蛋白酶(MMPs)出现过度表达和活性提高。MMPs是内源性蛋白水解酶，它主要通过降解细胞外基质、调节细胞间黏附、以及促进新生血管形成等参与组织重构、细胞增殖、恶性细胞浸润、转移等。MMP-7、9是MMPs家族中重要成员，它们的过度表达或活性的提高与肿瘤的生长、浸润和转移等有密切关系。此外，一些研究已证明，MMP-7、9在癌前病变组织中的表达较慢性胃炎组织中的表达升高。那么，胃炎I号方治疗胃癌前病变的机制是否与MMP-7、9有关？这将是本课题研究的重点。
　　研究目的：
　　本课题通过临床研究对胃炎I号方临床疗效进行较为客观的评价，并使用分子生物学技术以及免疫组织化学技术等，观察大鼠胃组织中 MMP-7、9蛋白的表达、酶的活性，以及MMP-7mRNA、MMP-9mRNA的表达，从而初步探索胃炎I号治疗胃癌前病变可能的作用机制，为临床更好的使用该方提供理论依据。
　　研究方法：
　　1.动物实验：将84只大鼠，雌雄各半，按体重随机分为6组，模型组24只，空白组、胃炎I号大、中、小剂量组及维酶素组各12只。造模期间，空白组给予正常饮食以及等体积生理盐水灌胃。其余各组给予以下处理措施：
　　①50μg/mL N-甲基-N’-硝基-亚硝基胍（MNNG）溶液自由饮用，造模期间不再给予其他饮水；
　　②盐酸雷尼替丁水溶液按每天0.03g/kg灌胃,每日1次；
　　③饥饱失常：连续2d喂食,保证足量,1d停食。造模共20周。造模成功后，胃炎I号大、中、小剂量组分别使用2.16g/(kg·d)、1.08g/(kg·d)、0.54g/(kg·d)的胃炎I号水煎液灌胃。维酶素组用0.86g/(kg·d)的维酶素水溶液灌胃。空白组和模型组均用0.18g/(kg·d)的生理盐水灌胃。给药3个月。实验结束后观察大鼠一般情况，取胃组织做病理检查。使用免疫组化技术观察MMP-7、MMP-9蛋白的表达。使用明胶酶谱法观察MMP-7、MMP-9酶的活性。使用聚合酶链反应(PCR)技术观察MMP-7mRNA、MMP-9mRNA的表达。
　　2.临床观察：符合纳入标准的胃癌前病变患者30例，按就诊时间随机分为胃炎I号治疗组和维酶素对照组，每组各15例。采用中医症候量表进行观察，比较两组治疗前后中医症状评分、两组患者的中医疗效，以及治疗后药物安全性观察。从而对胃炎I号方治疗胃癌前病变的临床疗效做出客观的评价。
　　研究结果：
　　1.动物试验：病理结果显示大鼠胃粘膜腺体萎缩，伴有肠上皮化生和不典型增生，提示造模成功。经胃炎I号和维酶素治疗后，上述病理改变减轻或消失。
　　大鼠胃组织MMP-7的表达：空白组与模型组比较有统计学意义（P=0.000）。大、中、小剂量组及维酶素组与模型组比较有统计学意义（P=0.000，P=0.000，P=0.005，P=0.032）。大、中、小剂量组之间无统计学意义，中剂量组与维酶素组之间有统计学意义（P=0.032）。大、小剂量组与维酶素组之间无统计学意义（P＝0.093，P=0.466）。
　　大鼠胃组织MMP-9的表达：空白组与模型组比较有统计学意义（P=0.001）。大、中、小剂量组及维酶素组与模型组比较有统计学意义（P=0.002，P=0.000，P=0.002，P=0.012）。大、中、小剂量组及维酶素组之间无统计学意义。
　　大鼠胃组织MMP-7活性：χ2＝26.533，df＝5，P＝0.000，各组间差异有统计学意义。从平均秩次的变化趋势看模型组活性最高，空白组活性最低。中剂量组较大、小剂量组、维酶素组MMP-7活性低。
　　大鼠胃组织MMP-9活性：χ2＝24.386，df＝5，P＝0.000，各组间差异有统计学意义。从平均秩次的变化趋势看模型组MMP-9活性最高，空白组活性最低。中剂量组较大、小剂量组、维酶素组MMP-9活性低。
　　大鼠胃组织MMP-7mRNA表达：χ2＝11.730，df＝5，P＝0.039，各组间差异有统计学意义。从平均秩次的变化趋势看模型组MMP-9mRNA表达水平较空白组上调。胃炎I号大、中、小剂量组和维酶素组较模型组表达水平下调。
　　大鼠胃组织MMP-9mRNA表达：χ2＝11.385，df＝5，P＝0.044，各组间差异有统计学意义。从平均秩次的变化趋势看模型组MMP-9mRNA表达水平较空白组上调，胃炎I号大、中、小及维酶素组表达水平较模型组下调。
　　2.临床研究：两组在性别、年龄段、病程段等方面比较无统计学意义(P均>0.05),提示两组具有可比性。中医证候量表调查显示，治疗前两组各症状比较无统计学意义(P均>0.05)。治疗后两组各症状比较，胃炎I号方对于改善痞满胀闷、胃脘疼痛、口干口苦、嗳气反酸、大便稀溏方面与维酶素有差异(P均<0.05)。二者在改善纳呆乏力症状方面无统计学意义；治疗组和对照组各症状治疗前后比较，胃炎I号方和维酶素均能改善各临床症状(P均<0.05)。两者在改善胃脘疼痛、嗳气反酸、口干口苦、大便稀溏方面胃炎I号方优于维酶素，在痞满胀闷、纳呆乏力方面两者无差别。两组中医疗效比较有统计学意义(P=0.045)，胃炎I号方疗效优于维酶素。
　　结论：
　　1.胃炎I号方对改善胃癌前病变大鼠一般情况，以及胃粘膜慢性炎症，逆转腺体萎缩、肠上皮化生等方面均有一定疗效。胃炎I号方对改善大鼠胃癌前病变组织异常的超微结构有一定的作用。
　　2.胃炎I号方治疗胃癌前病变的机制可能是降低MMP-7mRNA、MMP-9mRNA的表达，使大鼠胃组织MMP-7、MMP-9蛋白的表达下调，以及降低MMP-7、MMP-9酶的活性，多个环节共同起作用所致。
　　3.胃炎I号方和维酶素均能改善患者临床症状，两者中医疗效比较，胃炎I号方疗效优于维酶素。

目录

声明

引言

第一部分 文献研究

1 中医对胃癌前病变病因病机的认识

2 中医对胃癌前病变的治疗

3 中医药治疗胃癌前病变机理的研究进展

4 现代医学对胃癌前病变发病机制的研究

5 现代医学对胃癌前病变的治疗

6胃癌前病变动物模型的研究

第二部分 实验研究

1 材料与仪器

2 实验方法

3 检测方法

4 结果

5 结论

第三部分 临床观察

1研究对象和选择标准

2 研究方法

3 结果

4 结论

第四部分 讨 论

1 胃癌前病变动物模型的复制

2 基质金属蛋白酶-7、9与胃癌前病变的关系

3 胃癌前病变的中医病因病机探讨

4 胃炎I号方药探讨

结语

1 研究结论

2 创新点

3 问题与展望

参考文献

附录

在校期间发表论文及参加课题

致谢