广州地区绝经后妇女ER基因多态性与骨密度及OP中医证型的相关研究

摘要

第一部分文献研究
　　一中医对绝经后骨质疏松症病因病机的认识
　　“肾虚”是发病的根本原因，由于肾精的逐渐衰弱，才导致了骨的退变疏松。脾胃虚弱，气血不足与骨痿发生密切相关。肾为先天之本，脾为后天之本，两者相互滋养，相互为用。血瘀是老年病重要的病理因素之一，活血化瘀是防治原发性骨质疏松的重要环节。
　　二骨质疏松相关基因多态性的研究进展
　　骨质疏松症是多种因素导致的复杂疾病，它的发生与峰值骨量高低和骨量丢失速度密切相关，而遗传与环境因素参与了峰值骨量的达到、维持以及骨量丢失的调节。研究证实，遗传因素可解释60％～80％骨密度的变化。近年来，对导致骨质疏松相关基因的研究成为热点，VDR、ER、CTR、PTH等基因与骨质疏松密切相关。无论是双胞胎还是一般人群，B等位基因个体的BMD较低．而b等位基因者BMD较高。年轻人中BB基因型个体BMD比同年龄、同性别者低2个标准差，提示这类人群BMD丢失速度较快，检测VDR基因多态性能预测不同个体在不同年龄段的BMD。雌激素在维持更年期妇女的BMD及预防骨折中发挥重要作用。ER失能后的雌性或雄性鼠的骨矿化作用均明显减弱。同样，由于ER基因突变致雌激素抵抗或芳香化酶缺陷的男性，也表现为BMD明显减低，而补充雌激素后减低的骨量又逐渐增加。Masi等分析307名绝经后意大利妇女，发现TT和TC基因型出现频率较高，而且TT型者其腰椎BMD明显低于CC基因型者。Kanzawa等研究发现，BB型PTH基因人的腰椎BMD较Bb、bb型显著为高，认为PTH基因BstBI多态性与BMD有相关性；但PTH基因DraII多态性则与BMD无相关性。
　　三雌激素受体基因多态性与绝经后骨质疏松
　　绝经后骨质疏松是指绝经后妇女由于体内卵巢功能低下，雌激素水平低落，骨偶联过程失衡，破骨细胞的骨吸收大于成骨细胞的骨形成作用所导致的骨量减少，骨脆性增加，进而易于发生骨折的代谢性骨疾病。雌激素水平降低是绝经后骨质疏松发病的首要原因。研究表明，雌激素受体基因存在PvuII和XbaI两个多态酶切位点，酶切可分别产生以下基因型：PP、Pp、pp；XX、Xx、xx。根据复合基因型的等位基因构成，存在九种单倍型等位基因。研究表明，ER基因多态与骨质疏松的发生存在相关性。Kobayashi等分析日本Nagano县238名绝经后健康妇女基因型与BMD的关系发现：腰椎BMD的Z积分与PvuII位点相关，各基因型对应的BMD高低顺序为PPXx>xx，但无统计学意义。Mahonen对芬兰妇女、Qi等对澳大利亚的研究结论均认为pp基因型者腰椎BMD低。我国黄琪仁等研究认为，绝经后健康妇女ER的Pvu II基因型与股骨大转子处BMD显著相关，PP基因型者BMD低。
　　第二部分临床研究
　　一目的：
　　研究长期居住在广州地区的绝经后妇女雌激素受体基因多态性的分布规律及与骨密度、骨质疏松中医辨证分型的关系，为筛选骨质疏松相对高危人群提供理论依据。
　　二方法：
　　选取168名长期生活在广州地区的绝经后妇女，年龄45～70岁，平均58岁。运用双能X线骨吸收仪分别对其腰椎（腰1-腰4）的BMD进行测量，并用生物化学的方法测其血清中钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）、甲状旁腺激素（PTH）和降钙素(CT)的含量，用分子生物学的方法分析内切酶PvuII、Xba I限制性片段长度多态性(RFLP)，观察ER基因多态性在病例组及对照组的分布及与骨质疏松中医证型的关系。中医辨证分型分为肾阳虚型、肾阴虚型、气滞血瘀型和混合型。
　　三结果：
　　研究表明，168名绝经后妇女中，按照《中国人原发性骨质疏松症诊断标准》，其中骨质疏松病人108人（病例组）、非骨质疏松组60人（对照组）。广州地区绝经后妇女ER基因多态性与骨密度关系呈以下分布规律：PPXx>xx。复合基因型中PPxx的骨密度较其它基因型低。在分层分析中，表明PP型及复合基因型PPxx在骨质疏松组的分布频率高于非骨质疏松组，差异有显著性。按照中医辨证分型，广州地区绝经后女性骨质疏松证型多以肾阳虚为主。
　　四结论：
　　（一）广州地区绝经后妇女ER基因多态性的分布频率与骨密度的关系为：PP　　（二）PP型在骨质疏松组的分布频率高于非骨质疏松组，差异有显著性(P<0．01)；而复合基因型PPxx的分布明显高于对照组(P<0．O1)。初步认为这2种基因携带者是腰椎骨质疏松症的易患基因型。
　　（三）广州地区绝经后女性骨质疏松证型多以肾阳虚为主。ER受体基因多态性中特定的基因型与辨证分型有着密切的关系，对实际的辨证论治起指导作用，特别是根据遗传基因的多态性作为中医组方用药的手段，表明有该多态性时的生物学意义。

目录

声明

引言

第一部分 文献研究

一、中医对绝经后骨质疏松症病因病机的认识

1、肾虚是发病的根本原因

2、脾胃虚弱，气血不足与骨痿发生密切相关

3、脾肾相关学说与骨质疏松

4、血瘀与骨质疏松

二、骨质疏松相关基因多态性的研究进展

1、维生素D受体(vitamin D receptor，VDR)基因

2、雌激素受体(estrogen receptor，ER)基因

3、降钙素受体(calcitonin receptor，CTR)基因

4、甲状旁腺素(Parathyroid hormone,PTH)基因

5、骨钙素（Osteocalcin,OC）基因

6、白细胞介素-1受体拮抗基因

三、雌激素受体基因多态性与PMOP的关系及研究现状

1、雌激素在骨代谢中的作用

2、雌激素受体的结构与雌激素受体基因结构

3、雌激素受体基因多态与骨密度关系

4、雌激素受体基因与绝经后骨质疏松

第二部分 临床研究

一 临床资料

（一）病例纳入标准

（二）研究对象排除标准

（三）一般资料

二 研究方法

（一）临床试验材料

（二）研究方法

(三)统计学方法

三 结果

1、限制性片段长度多态性（RFLP）结果

2、所有入选对象（168例）ER基因型频率分布

3、PvuⅡ各基因型与腰椎BMD Z值的关系

4、XbaI各基因型与腰椎BMD Z值的关系

5、PvuⅡ、XbaI复合基因型与腰椎的BMD Z值的关系

6、两组ER基因XbaI酶切多态性分布

7、两组ER基因PvuⅡ酶切多态性分布

8、PvuⅡ各基因型、BMD Z值与中医辨证分型之间的关系

9、XbaI各基因型、BMD Z值与中医辨证分型之间的关系

10、PvuⅡ、XbaI酶切后各复合基因型、BMD Z值与中医辨证分型的关系

11、PPxx基因型与其他各组基因型总和的腰椎BMD Z值与中医辨证分型的关系

四 讨论

（一）雌激素及其受体在骨代谢中的作用

（二）雌激素受体基因多态性与骨密度关系

（三）广州地区绝经后妇女雌激素受体（ER）等位基因分布情况及与腰椎BMD相关性

（四）祖国医学对绝经后骨质疏松症病因病机及辨证分型的认识

（五）基因辩证理论在广州地区绝经后妇女OP中医证型与ER多态性关系的初探

（六）从分子生物学水平对绝经后骨质疏松症进行诊断和定位的意义

结语

一 临床研究的结论

二 临床研究的问题与展望

参考文献

附一缩略词表

附二临床调查表

附三中医虚证辨证参考标准

刘庆思教授关于原发性骨质疏松症中医辨证分型

血瘀证诊断参考标准

中国人骨质疏松症建议诊断标准（第二稿）

附四附图

附五

在学期间发表论文

在学期间主持及参与课题

致谢