玉叶解毒颗粒体外抗呼吸道病毒及体内抗甲1型流感病毒的作用研究

摘要

文献研究
　　呼吸道病毒感染是一种较常见的急性呼吸道疾病，可发生于各个年龄段。引起本病的病毒种类甚多，包括的病种也很多，临床表现较为多样，其中严重者呈细支气管炎和肺炎，可引起急性呼吸窘迫和心衰，甚至导致死亡。特别是呼吸道病毒易发生变异，从而可能增加其致病性，或发生一些新的疾病，如近年所发生的SARS、人禽流感、甲型H1N1流感等，对人类的健康和生命构成了威胁，甚至严重影响到社会安宁和国民经济的正常发展，所以尤其引起人们的重视。
　　本文分别从四种呼吸道病毒的结构谈起，叙述了各病毒的复制，流行病学特征，发病机制，临床表现，检测和疫苗等的研究进展，在对抗呼吸道药物学研究中，阐述了西医和中医在抗呼吸道药物上的不同的机理和药物，进一步表明中医药在抗病毒研究中优势。
　　实验研究
　　1.目的：从体内和体外进行试验测定，研究玉叶解毒颗粒体外抗呼吸道病毒及体内抗甲1型流感病毒的作用。
　　2.方法：体外实验，通过狗肾细胞(MDCK)的培养，将流感病毒接种于细胞上,观察玉叶解毒颗粒在不同作用下抗流感的不同表现；通过HEL细胞的培养，观察玉叶解毒颗粒抗鼻病毒和腺病毒的作用；通过A549的培养，观察玉叶解毒颗粒抗合胞病毒的作用。体内试验，通过滴鼻法，用流感病毒感染NIH小鼠，观察玉叶解毒颗粒对小鼠肺指数，死亡率，肿瘤坏死因子（TNF-α），白细胞介素10（IL-10），神经氨酸酶及病毒核酸含量的影响。
　　3.结果：
　　3.1体外实验
　　在体外实验中，首先是流感病毒的扩种和毒力的检测，通过鸡胚尿囊腔进行流感病毒的扩种，再用血凝法和蚀斑法进行病毒滴度的测定，按照血凝实验结果，查对数表，计算TCID50=3.67。再将药物分为不同浓度进行药物毒性实验，确定最大无毒浓度，再观察玉叶解毒颗粒在预防作用，治疗作用，直接杀伤作用，阻止病毒复制的动态下，对抗流感病毒的作用情况，实验表明：在浓度为125g/L时，玉叶解毒颗粒均具有上述作用，且将病毒的滴度降低2个梯度，计算出治疗指数为2.24。在HEL细胞上，玉叶解毒颗粒在浓度分别为12.5g/L和6.25g/L时，能抑制鼻病毒（TCID50=5.5）和腺病毒（TCID5=5.67），且治疗指数分别为17.99和46.89。在A549细胞上，在无毒浓度为3.12g/L时，能很好的抑制合胞病毒（TCID50=5.0）。
　　3.2体内试验
　　玉叶解毒颗粒大剂量(15g/kg)可以降低小鼠的肺指数，减轻了肺实变，改善病毒性肺炎的症状，提高了小鼠的存活率,有死亡保护作用。可以降低小鼠体内 TNF-α含量，提高 IL-10的含量，证明该药物可以提高小鼠机体的免疫力，进而改善病毒感染导致的免疫功能紊乱。未能明显减少减少病毒神经氨酸酶的含量，说明此药可能的作用靶点不是 NA。荧光 PCR检测表明玉叶解毒颗粒大剂量组降低了甲1型流感病毒感染小鼠肺组织中病毒量，从而降低病毒对小鼠机体的损伤。
　　结论：
　　实验研究表明：玉叶解毒颗粒在体外实验中125g/L就很好的抑制流感病毒，并且具有多种抗流感病毒的作用；在浓度为12.5g/L和6.25g/L时，能抑制鼻病毒和腺病毒；在浓度为3.12g/L时，能抑制合胞病毒。在体内试验中，大剂量(15g/kg)的药物可以很好抑制小鼠体内流感病毒，减轻了小鼠的肺炎症状，延长了小鼠的生命。综上所述，表明玉叶解毒颗粒不仅在体外有很好抗呼吸道病毒的效果，而且在体内是一种很有效地抗流感药物，为临床的广泛应用提供了可靠的实验依据。而抗其他呼吸道病毒的体内作用还有待证实。

目录

声明

前言

1. 文 献 研 究

1.1 四种呼吸道病毒研究现状

1.2 防治呼吸道病毒的药物学研究

2 实 验 研 究

2.1 玉叶解毒颗粒抗呼吸道病毒的体外实验研究

2.2 玉叶解毒颗粒对甲1型流感病毒致小鼠肺炎的抑制作用及小鼠肺组织病理变化

2.3 玉叶解毒颗粒对甲1型流感病毒感染小鼠的死亡保护作用

2.4 玉叶解毒颗粒对流感病毒感染小鼠血清中TNF-а、IL-10的影响

2.5 玉叶解毒颗粒对流感病毒感染小鼠肺组织中神经氨酸酶的影响

2.6玉叶解毒颗粒对流感病毒感染小鼠肺组织中核酸含量的影响

讨论

1． 实验设计

2． 实验结果分析

3．存在的问题与展望

参考文献

附 录 1流感病毒甲1型FM1株毒力的增强及传代方法

附 录 2用蚀斑法对流感病毒毒力的检测

小鼠肺组织HE染色结果图示

荧光PCR法检测图片结果

结语

致谢