复方穿心莲体外抗呼吸道病毒及体内抗甲1型流感病毒的作用研究

摘要

呼吸道病毒是一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变或仅以呼吸道为侵入门户，主要引起呼吸道组织器官病变的病毒。主要的致病病毒包括：流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、腺病毒、鼻病毒、冠状病毒和某些肠道病毒(如柯萨奇病毒、埃可病毒等)以及单纯疱疹、水痘-带状疱疹、风疹、麻疹等病毒。引起本病的病毒种类甚多，包括的病种也很多，临床表现较为多样，据统计，90％以上急性呼吸道感染由病毒引起，尤以上呼吸道感染为临床上的常见病和多发病。感染者中严重者呈细支气管炎和肺炎，可引起急性呼吸窘迫和心衰，甚至导致死亡[1]。特别是呼吸道病毒易发生变异，从而可能增加其致病性，或发生一些新的疾病，如近年所发生的SARS、人禽流感、甲型H1N1流感等，对人类的健康和生命构成了威胁，甚至严重影响到社会安宁和国民经济的正常发展，所以尤其引起人们的重视。中医对呼吸道病毒感染多辨证为感冒、咳嗽湿肺热等，其基本病机为外邪由口鼻皮毛入侵肺卫，卫表不和，肺失宣肃，甚至邪热传里，热壅肺气。西医则认为以病毒感染多见，其次为细菌感染，少部分为支原体感染[2]。现已明确许多中药对机体有抗病毒及免疫功能调节作用，本文从四种呼吸道病毒的结构谈起，叙述了各病毒的病毒学特征，流行病学特征，发病机制，临床表现，病毒的检测和疫苗等的研究进展，在抗呼吸道药物学研究中，阐述了西医和中医在抗呼吸道药物上的不同的机理和药物，进一步表明中医药在抗病毒研究中的优势。
　　1.1.实验研究
　　1.1.1.目的：通过对体内和体外实验相关指标的测定，研究复方穿心莲体外抗呼吸道病毒及体内抗甲1型流感病毒的作用。
　　1.1.2.方法：体外实验，选用狗肾细胞(MDCK)、人胚肺二倍体细胞（HEL）和人肺癌细胞（A549），将病毒接种于对其敏感的细胞上，通过试验结果的测定分析，观察复方穿心莲在MDCK上对流感病毒FM1株的预防、治疗和直接杀伤作用；观察复方穿心莲在HEL上抗鼻病毒和腺病毒作用；观察复方穿心莲在A549上抗呼吸道合胞病毒的作用。体内试验，使用滴鼻法感染NIH小鼠，观察复方穿心莲对甲1型流感病毒感染小鼠的肺指数，死亡率，肿瘤坏死因子（TNF-α），白细胞介素10（IL-10），神经氨酸酶及病毒核酸含量的影响。
　　1.1.3.结果：
　　1、体外实验在体外实验中，首先对流感病毒进行扩增和毒力检测。通过鸡胚尿囊腔扩增流感病毒，用血凝法和蚀斑法测定病毒滴度。对照血凝实验结果，查对数表，计算病毒的TCID50=3.67。然后将药物分为不同浓度进行药物毒性实验，确定最大无毒浓度，再观察复方穿心莲在MDCK上对甲1型流感病毒的预防作用，治疗作用，直接杀伤作用以及在阻止病毒复制的动态过程中抗流感病毒的作用。实验表明：在浓度为125g/L时，复方穿心莲均具有上述作用，且将病毒的滴度降低2个梯度，计算出治疗指数为2.24。在HEL细胞上，复方穿心莲在浓度分别为12.5g/L和6.25g/L时，能抑制鼻病毒（TCID50=5.5）和腺病毒（TCID5=5.67），且治疗指数分别为17.99和46.89。在 A549细胞上，在无毒浓度为3.12g/L时，能很好的抑制呼吸道合胞病毒（TCID50=5.0）。
　　2、体内试验复方穿心莲大剂量(15g/kg)可以降低小鼠的肺指数，减轻肺实变，改善病毒性肺炎的症状，提高小鼠的存活率,对感染病毒的小鼠有死亡保护作用。复方穿心莲可以降低感染病毒的小鼠体内TNF-α含量，提高IL-10的含量，证明该药物通过提高小鼠机体免疫力改善病毒感染导致的免疫功能紊乱状态，从而提高小鼠的存活率。该药物未能明显减少病变组织中所含病毒的神经氨酸酶含量，说明此药可能的作用靶点不是NA。荧光PCR检测结果表明复方穿心莲大剂量组降低了甲1型流感病毒感染小鼠肺组织中病毒量，从而减轻病毒对小鼠机体的损伤。
　　1.1.4.结论实验研究表明：在体外实验中，复方穿心莲在125g/L的浓度下就能抑制病毒且具有抗甲1型毒的作用（预防、直接杀伤、治疗作用）；在浓度为12.5g/L和6.25g/L时，能抑制鼻病毒和腺病毒；在浓度为3.12g/L时，能抑制合胞病毒。在体内试验中，大剂量(15g/kg)的药物可以很好抑制小鼠体内流感病毒，减轻了小鼠的肺炎症状，延长小鼠生命。综上所述，复方穿心莲不仅在体外能很好的抗多种呼吸道病毒，在体内也是一种很有效地抗甲1型流感病毒药物，为临床的广泛应用提供了可靠的实验依据。而复方穿心莲在动物体内抗其他呼吸道病毒的作用还有待进一步的实验证实。

目录

声明

前言

第一章 文献研究

1.1流感病毒

1.2 鼻病毒

1.3腺病毒

1.4 合胞病毒

1.5 防治呼吸道病毒的药物学研究

第二章 实验研究

2.1 复方穿心莲抗呼吸道病毒的体外实验研究

2.2 复方穿心莲对甲1型流感病毒致小鼠肺炎的抑制作用及小鼠肺组织病理变化

2.3 复方穿心莲对甲1型流感病毒感染小鼠的死亡保护作用

2.4 复方穿心莲对流感病毒感染小鼠血清中TNF-а、IL-10的影响

2.5 复方穿心莲对流感病毒感染小鼠肺组织中神经氨酸酶的影响

2.6复方穿心莲对流感病毒感染小鼠肺组织中核酸含量的影响

2.7复方穿心莲对流感病毒FM1感染胸腺缺陷小鼠血清中IFN-γ、IgG含量的影响

讨论

1．实验设计

2. 实验结果分析

3．存在的问题与展望

3.1 存在问题

3.2 展望

附 录 1

附 录 2

附 录 3

结语

参考文献

致谢