聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体的研究

摘要

多西他赛(多烯紫杉醇，Docetaxel，DTX)是经由欧洲红豆杉( Europeanyew,Taxus baccata)树皮或针叶中提取物10-DAB合成而来的半合成紫杉醇类似物，具有广谱的抗癌活性，是最有潜力的抗恶性肿瘤药物之一。但是，由于多西他赛溶解度低，对正常组织毒副作用大，严重影响它的使用效果和应用范围。因此开发新的高效、低毒制剂是多西他赛研究的关键。
　　脂质体（Liposomes）是将药物（以溶液或粉末的形式）包封于类脂质双分子层的囊泡状载体制剂，是靶向给药系统的一种新剂型，具有高效、靶向、低毒、无免疫原性等优点。作为一种新型给药系统，脂质体同样存在一些问题和不足，如稳定性较差，易聚集、渗漏，进入血液后易被网状内皮系统(Reticuloendothelial system,RES)快速清除等，致使脂质体无法完整到达目标部位，治疗效果欠佳，甚至增加不良反应。
　　为了改善脂质体的稳定性问题，相关新型脂质体的研究、应用越来越受到重视。长循环脂质体（Long-circulating liposome）就是众多新型脂质体中的一种，它是一种表面含有天然或合成聚合物修饰的类脂衍生物的新型脂质体，其中聚乙二醇（PEG）修饰聚合物的研究较为广泛和深入。聚乙二醇分子与磷脂分子通过共价键结合形成PEG衍生化磷脂，能有效保护脂质体，阻止血液中不同组分对脂质体的结合，降低了RES对脂质体的识别和摄取，延长在体循环时间，提高半衰期；同时易通过肿瘤新生血管间隙渗漏到肿瘤组织中，提高渗透和滞留效应(EPR效应,Enhanced permeability and retention effect)，提高药物在肿瘤部位的摄取率。因此，为改变多西他赛（DTX）体内分布特征、降低对正常组织的毒副作用，本课题制备多西他赛的聚乙二醇衍生物（PEG）修饰长循环脂质体（PEG-DTX-LP），并对其制备工艺、质量标准以及初步稳定性进行相关研究。
　　本课题参照2010年版《中国药典》脂质体制剂指导原则、注射剂制剂通则，《新药转正标准》中原料药多西他赛的标准，《化学药品注射剂基本技术要求》，《化学药五类注册管理办法》及脂质体相关文献展开研究.
　　首先对DTX进行处方前研究，建立DTX的定量测定方法学、油水分配系数、在不同介质中的平衡溶解度。结果表明DTX为难溶性药物，lgP值为2.28左右，适合制备脂质体，在水中的溶解度仅为4.61 mg?L-1。
　　研究包封率的测定方法，选取药典上提及的，较为常用的分离脂质体与游离药物的技术：葡聚糖凝胶过滤法、微柱离心法、透析法进行考察。结果表明，葡聚糖凝胶过滤法、微柱离心法都无法准确测得包封率，对透析法进行了较为系统的考察，最后筛选出适宜的参数条件如下：透析袋内溶液体积1mL、透析介质0.5％Tween-80水溶液150mL、透析介质温度0℃、透析8h。
　　处方和制备工艺的研究，通过处方筛选试考察不同的脂药比、磷脂（PC）与胆固醇（Chol）比例、PEG2000-DSPE用量、不同 pH值缓冲液，溶解药物和膜材的氯仿量等因素对PEG-DTX-LP质量的影响，以包封率、载药量为主要评价指标；再通过Box-Behnken效应面法优化处方，得到优化处方PC:drug=18.08:1、PC:Chol=5:1、PEG2000-DSPE浓度为2%；然后对脂质体的制备方法进行筛选，以包封率和性状特征为指标，最终确定采用薄膜-超声分散法制备脂质体。
　　对PEG-DTX-LP的质量研究进行较为系统的研究，主要包括形态学考察、鉴别、检查（酸度、包封率及载药量、体外释放度、氧化程度）、含量测定等。结果表明， PEG-DTX-LP气微腥、乳白色，无絮凝，无药物沉淀，分散均匀，对光有明显的乳光现象，流动性好；通过透射电镜观察，圆形或类圆形，粒径分布均匀，分散性很好；平均粒径为199±15nm呈单峰分布，粒度分布范围较窄且符合正态分布；表面Zeta电位为-16.2±5.23mV；通过紫外-可见分光光度计鉴别，供试品与DTX对照品两者皆在235nm波长处有最大吸收；通过高效液相色谱法鉴别，供试品主峰的保留时间与DTX对照品主峰的保留时间一致；PEG-DTX-LP经5%葡萄糖或0.9%氯化钠注射液适量稀释后，pH为6.5～7.0，符合药典规定的注射剂酸度要求；透析法测定其包封率及载药量，结果三批样品的包封率均大于80%，符合药典要求；体外释放试验结果表明，PEG-DTX-LP具有明显的缓释作用，体外释放曲线符合Higuchi方程，前0.5小时的突释量远小于40%，满足药典要求；三批样品含量测定结果均匀。
　　对PEG-DTX-LP的初步稳定性研究，从影响因素试验、留样三个月、配伍稳定性三个方面入手。结果本品贮存条件为2-8℃、密闭，遮光处保存；留样三个月，包封率略有下降，但质量仍满足要求；PEG-DTX-LP经0.9％氯化钠注射液或5%葡萄糖注射液稀释后，在室温、室内灯光下放置8h内稳定性良好、质量无明显变化。
　　综上所述，本课题采用薄膜-超声分散法制备了聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体，以包封率、载药量、外观性状等为重点评价指标，制备出符合药典要求、质量稳定的脂质体，并对其进行了质量标准研究和初步的稳定性研究，为后续质量标准的制定及完整的稳定性考察奠定基础。

目录

声明

引言

第一章 文献研究

1.1 肿瘤发病情况概述

1.2 脂质体

1.3 多西他赛研究概述

1.4 研究目的与意义

第二章 聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体的处方前研究

2.1 仪器、试药与试剂

2.2 多西他赛定量测定方法学的建立

2.3 多西他赛油水分配系数的测定

2.4 多西他赛在不同介质中平衡溶解度的测定

2.5 讨论与小结

第三章 脂质体包封率测定方法的建立

3.1 仪器、试药与试剂

3.2 药量的测定

3.3 脂质体与游离药物分离的技术

3.4 包封率测定方法的确定

3.5 讨论与小结

第四章 聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体的处方和制备工艺研究

4.1 仪器、试药与试剂

4.2 聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体的处方研究

4.3 聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体的制备工艺研究

4.4 讨论与小结

第五章 聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体的质量研究

5.1 仪器、试药与试剂

5.2 形态学观察

5.3 鉴别

5.4 检查

5.5 含量测定

5.6 讨论与小结

第六章 聚乙二醇修饰的多西他赛长循环脂质体的初步稳定性研究

6.1 仪器、试药与试剂

6.2 影响因素试验

6.3 留样稳定性

6.4 配伍稳定性

6.5 讨论与小结

结语

参考文献

在校期间发表论文情况

致谢