补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者免疫耐受的影响研究

摘要

研究目的: 通过本研究，评价补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的血清HBV DNA定量与血清HBsAg、HBeAg定量及肝功能指标的影响，从而验证其临床疗效。通过观察补肾健脾解毒方干预对慢性HBV携带者CD4+CD25+Treg表达频率及功能，DC成熟缺陷、数量及免疫功能指标，以及细胞免疫功能指标的影响，探求其打破免疫耐受、增强细胞免疫功能的机制。以期为临床治疗慢性乙肝病毒携带者提供有效的中药复方，进而为中医药治疗慢性HBV携带者提供思路和理论依据。 研究方法: 采用安慰剂对照的研究方法，分为2个试验组。治疗组纳入30例符合诊断标准的慢性HBV携带者，采用补肾健脾解毒方干预;对照组纳入10例健康志愿者，采用安慰剂干预，48周后评价疗效。观察补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者(1)血清HBVDNA定量、血清乙肝标志物HBsAg、HbeAg定量的变化及阴转情况的影响;(2)CD4+CD25+Treg表达频率及功能(IL-10、TGF-β)的影响;(3)DC成熟缺陷（形态、表型分析）、数量及免疫功能指标（MLR、IL-12、IFN-γ）的影响;(4)细胞免疫功能指标(CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+)的影响。并观察不良反应的发生。 研究结果: 1补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者的临床疗效 补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者48周，血清HBV DNA水平从8.270lg IU/ml下降至7.168 lg IU/ml，平均下降幅度达到1.102 lg IU/ml，差异有统计学意义(P＜0.05);其中下降较基线水平＞1lg IU/ml、＞2 lg IU/ml、＞3 lg IU/ml的例数（百分数）分别为:14(50.00％)、6(17.86％)、2(7.14％)，无阴转病例;干预结束后血清HBV DNA载量＜105 IU/ml有3例，占总数比例为3/28(10.71％)。此3例基线血清HBV DNA载量分别为8.25×106 IU/ml、2.93×107 IU/ml、6.74×105 IU/ml;对应的干预结束时的血清HBV DNA载量分别为2.69×103 IU/ml、5.41×103 IU/ml、1.82×104IU/ml;对应的下降幅度分别是3.487 lg IU/ml、3.734 lg IU/ml、1.569 lg IU/ml，下降幅度较大。 补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者48周，血清HBsAg定量均值从4.618 lgIU/ml下降至3.993 lg IU/ml，平均下降0.625 lg IU/ml，差异有统计学意义(P＜0.05);其中下降较基线水平＞0.5 lg IU/ml、＞1 lg IU/ml、＞2 lg IU/ml的例数（百分数）分别为:9(32.14％)、5(17.86％)、1(3.57％)，无阴转病例出现。而血清HBeAg均值从基线的1108.52 S/Co下降至774.07 S/Co，平均下降幅度达到334.45S/Co，差异有统计学意义(P＜0.05);无1例出现血清HBeAg阴转。 补肾健脾解毒方治疗慢性HBV携带者48周，血清ALT、AST、γ-GT水平均值分别从基线的33.8 IU/L、26.3 IU/L、31.7 IU/L下降为27.4 IU/L、18.7 IU/L、25.1IU/L。 2补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的免疫调节作用机制 慢性HBV携带免疫耐受者的外周血CD4+CD25+Treg表达频率为7.68％，明显高于健康人的5.72％（P＜0.05）;血清IL-10和TGF-β含量均明显高于健康人(P＜0.05)。经补肾健脾解毒方干预48周，慢性HBV携带者的CD4+CD25+Treg表达频率、血清IL-10和TGF-β含量均出现明显下降（P＜0.05），接近健康人对照组水平（均有P＞0.05）。 慢性HBV携带免疫耐受者的DC成熟表面标记物HLA-DR、CD86、CD80和CD1α的表达水平分别为61.34％、55.78％、42.63％、43.17％，与DC诱导MLR的能力、MLR上清液中IL-12和IFN-γ的表达水平全都明显低于健康人（均有P＜0.05）。补肾健脾解毒方干预48周，MLR上清液中IL-12和IFN-γ的表达水平明显上升，对DC诱导MLR能力也有显著提升（均有P＜0.05）;但48周后治疗组的HLA-DR、CD86、CD80和CD1α的表达水平，以及MLR上清液中IFN-γ的表达水平，DC诱导MLR的能力仍显著低于对照组（均有P＜0.05），而IL-12则接近健康人对照组水平（P＞0.05）。 而反映细胞免疫功能的指标方面，慢性HBV携带者的外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞表达水平分别为62.94％、32.68％，明显低于健康人对照组的72.28％、39.49％;而CD8+T淋巴细胞的表达水平为29.03％，则明显高于健康人对照组的23.04％; CD4+/CD8+比值方面，慢性HBV携带者为1.18，显著低于健康人对照组的1.77（以上均有P＜0.05）。补肾健脾解毒方干预48周后，慢性HBV携带者治疗组的CD3+、CD4+T淋巴细胞的表达水平分别上升至67.35％、37.22％，而CD8+T淋巴细胞的表达水平则下调至24.41％，CD4+/CD8+比值明显上升至1.61（均有P＜0.05）。但48周时两组比较，慢性HBV携带者的CD3+T淋巴细胞的表达水平仍低于对照组（均有P＜0.05），而CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达水平以及CD4+/CD8+比值则与对照组无显著差异(均有P＞0.05)。 研究结论: 补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的HBV DNA复制、血清乙肝病毒标志物(HBsAg、HBeAg)的表达有一定的抑制作用，并有一定的保肝作用，进而可能减少免疫耐受状态下高HBV负荷所带来疾病进展的风险。 补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者的抗HBV作用主要是通过下调CD4+CD25+Treg的表达，促进DC成熟，增强细胞免疫功能，进而抑制/清除HBV而实现的:(1)通过减少血清IL-10、TGF-β分泌来降低对CD4+CD25+Treg的刺激，下调CD4+CD25+Treg的表达，减轻CD4+CD25+Treg主导的免疫抑制作用，激起HBV特异性免疫应答，进而抑制/清除HBV;(2)通过促进DC成熟，增强DC诱导MLR能力，从而增强DC的抗原递呈能力，调节Th1/Th2免疫反应，诱导T细胞产生有效的免疫应答，进而抑制/清除HBV;(3) DC的成熟，使iDC诱导产生的CD4+CD25+Treg表达减少，而Treg的表达减少使DC与非调节性T细胞的结合并抑制DC的活化、成熟和刺激T细胞增殖的能力上升，使CD3+、CD4+T淋巴细胞表达水平提升，CD8+T淋巴细胞的表达水平下降，CD4+/CD8+比值趋于正常，诱导病毒特异性CTL能力增强，进而抑制/清除HBV。

目录

声明

摘要

引言

第一章 慢性HBV携带免疫耐受状态的中西医研究概况

1．1 慢性HBV携带的流行病学特征与疾病进展风险

1．1．1 慢性HBV携带的流行病学特征

1．1．2 慢性HBV携带的疾病进展风险

1．2 慢性HBV携带的免疫耐受机制与相关细胞

1．2．1 免疫耐受是HBV感染慢性化的主要机制

1．2．2 慢性HBV携带免疫耐受状态主要相关细胞

1．3 慢性HBV携带者的现代医学治疗概况

1．4 中医药对慢性HBV携带的诊疗概况

1．4．1 慢性HBV携带的病因病机、证候规律

1．4．2 慢性HBV携带者的中医药治疗概况

第二章 补肾健脾解毒方对慢性HBV携带者免疫耐受的影响研究

2．1 试验设计

2．2 资料与方法

2．2．1 研究对象

2．2．2 诊断标准

2．2．3 纳入标准

2．2．4 排除标准

2．2．5 试验药物及干预方法

2．2．6 观察指标及方法

2．2．7 疗效判定标准

2．2．8 质量控制

2．2．9 伦理学

2．2．10 统计学分析

2．3 研究结果

2．3．1 试验完成情况

2．3．2 临床疗效指标的变化情况

2．3．3 对CD4+CD25+Treg表达频率及功能的影响

2．3．4 对DC成熟缺陷及免疫功能指标的影响

2．3．5 补肾健脾解毒方的安全性情况

2．4 讨论

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文及参与课题情况

致谢