Wistar大鼠超排及胚胎冷冻研究

摘要

本研究采用10 IU/只、20 IU/只和30 IU/只3种剂量的孕马血清促性腺激素－人绒毛膜促性腺激素(PMSG－HCG)对8～9周龄的Wistar大鼠进行超排处理，收集不同发育时期的胚胎，以探讨Wistar大鼠不同发育阶段胚胎所需超排试剂的最佳剂量以及采集不同发育期胚胎的方法；收集的Wistar大鼠2－细胞期胚胎和桑葚胚，利用冻存管法，用不同冷冻剂组合(DAP213、SDP0323)进行玻璃化冷冻，比较其冷冻复苏后的胚胎复苏率、移植产仔率，筛选新的胚胎冻存液，用于建立大鼠胚胎冷冻库。
　　 结果表明：(1)将8～9周龄的wistar雌鼠60只随机分为三组，分别用PMSG和HCG以不同的处理剂量(10IU，20IU，30IU)进行超排处理，注射HCG的当日与雄性Wistar大鼠1:1合笼、交配，次日早检查阴栓，确认受孕。1.5d采集2-细胞期胚胎，每只平均获得胚胎数分别为(12.1±4.6)、(23.1±10.2)和(24.9±8.2)枚，其中激素剂量为30 IU/只时超排效果最好。经统计学t-检验分析，当分别注射20 IU/只、30 IU/只剂量PMSG和HCG时，均与10IU剂量有显著性差异(P<0.01)；3.5d采集桑葚期胚胎，每只平均获得胚胎数分别为(10.3±5)、(23.7±17.2)和(17.2±5.9)枚，注射20 IU/只剂量的PMSG和HCG时，所获取的桑葚胚(23.7.±17.2)明显高于10 IU/只剂量组(10.3±5)，经统计学t－检验分析，两者之间有显著性差异(P<0.05)。(2)利用冷冻管方法，冷冻Wistar大鼠2－细胞期胚胎，DAP213冻存液冻存87枚，胚胎复苏后形态正常45枚(51.7％)，移植43枚胚胎，产仔15只(34.9％)；SDP0323冻存液冻存81枚，胚胎复苏后形态正常56枚(69.1％)，移植56枚胚胎，产仔23只(41.1％)；SDP0323冻存液冷冻大鼠2－细胞期胚胎的平均复苏率和平均产仔数均比DAP213冻存液组高；但两种冻存液的胚胎冷冻复苏率和产仔率无统计学差异(P>0.05)。同样方法冷冻Wistar大鼠桑葚胚，DAP213冻存液冻存256枚胚胎复苏后形态正常176枚(68.8％)，移植174枚胚胎，产仔32只(19.6％)；SDP0323冻存液冻存214枚，胚胎复苏后形态正常172枚(80.4％)，移植169枚胚胎，产仔32只(21％)。SDP0323冻存液冷冻大鼠桑葚胚的平均复苏率和平均产仔数均比DAP213冻存液组高；但两种冻存液的胚胎冷冻复苏率和产仔率无统计学差异(P>0.05)。两组冷冻试剂组合均可作为对Wistar大鼠2－细胞期胚胎和桑葚胚进行冷冻保存的有效方法，可用于建立大鼠胚胎库。