淫羊藿苷对去势大鼠骨质疏松症影响的实验研究

摘要

目前传统治疗骨质疏松的药物主要采用雌激素，降钙素，氟化物，钙剂，维生素D等，虽然在治疗过程中有一定的疗效，但无法避免在治疗中产生的副作用。中医药治疗骨质疏松症因其疗效显著，副作用小，费用低等优点已被逐渐应用于骨质疏松的临床治疗中。淫羊藿来源于小檗科淫羊藿属植物，是中医治疗骨质疏松的常用药物之一，本研究选用SD雌性大鼠，采用手术切除双侧卵巢致骨质疏松模型，用淫羊藿苷灌喂实验大鼠，取尿液、血液、股骨和腰椎。测尿脱氧吡啶酚(DPD)、碱性磷酸酶、骨密度、骨生物力学、骨组织学和OPGmRNA基因变化。从而探讨淫羊藿苷对去势后大鼠骨代谢的干预，这将为淫羊藿治疗绝经后骨疏松症提供理论实验依据。为此本研究完成了以下3个实验：
　　 实验1：大鼠骨质疏松模型的建立与鉴定。选用成年SD雌性大鼠18只，分为3组：A假手术组(SHAM)，B切除双侧卵巢组(OVX)，C雌激素组(双卵巢切+雌激素)。结果表明：OVX组ALP值与SHAM组比较有明显升高，去势组腰椎和股骨骨密度测定结果与假手术比较显著降低，骨组织学观察： OVX组与SHAM组比较，骨皮质变薄，骨髓腔扩大，骨小梁分布稀疏，骨小梁变细，粗细不一，有断裂现象，OVX组大鼠子宫重量较SHAM组轻75.5％。
　　 实验2：淫羊藿苷对去势大鼠骨质疏松影响的实验研究。选用成年SD雌性大鼠，分为：A假手术组(SHAM)，B切除双侧卵巢组(OVX)，C雌激素组(双卵巢切+雌激素)D1低剂量淫羊藿苷组(双卵巢切除+低剂量淫羊藿苷组)，D2中剂量淫羊藿苷组(双卵巢切除+中剂量淫羊藿苷)，D3高剂量淫羊藿苷组(双卵巢切除+高剂淫羊藿苷)。实验结果表明：中、高剂量淫羊藿苷可提高去势大鼠骨密度，骨强度。
　　 实验3：淫羊藿苷对去势大鼠骨髓OPG mRNA基因表达的影响：选用成年SD雌性大鼠，分为：A假手术组(SHAM)，B切除双侧卵巢组(OVX)，C雌激素组(双卵巢切+雌激素)D1低剂量淫羊藿苷组(双卵巢切除+低剂量淫羊藿苷组)，D2中剂量淫羊藿苷组(双卵巢切除+中剂量淫羊藿苷)，D3高剂量淫羊藿苷组(双卵巢切除+高剂淫羊藿苷)。实验结果显示；RT-PCR半定量分析结果表明，大鼠切除卵巢后3个月，OVX组骨髓细胞OPG mRNA表达与SHAM、E、D2、D3组比较电泳带亮度明显减弱，表明：中、高剂量淫羊藿苷对骨吸收有较强的抑制作用。
　　 研究表明：
　　 ⑴本实验选用健康三月龄雌性SD大鼠，采用切除大鼠卵巢的方法，造成动物骨质疏松模型，结果显示：去势大鼠组血清ALP较假手术组明显增高，股骨和腰椎骨密度值较对照组明显降低，去势组大鼠骨小梁较对照组稀疏，数量减少，骨皮质变薄，子宫重量较对组明显交轻。实验结果表明：该实验能够造出理想的动物骨质疏松模型。为选用疗效显著的抗骨质疏松治疗药物提供了理想的动物实验模型，同时显示：雌激素缺乏与绝经后骨质疏松症具有明确的因果关系。
　　 ⑵用淫羊藿苷对骨质疏松动物模型进行干预，结果显示：淫羊藿苷能显著提高去势大鼠的骨密度、骨强度、OPGmRNA基因的表达、降低尿DPD的排出浓度和增加骨小梁的密度。认为中药淫羊藿苷具有雌激素样的作用。可有效抑制绝经后骨量的丢失。
　　 ⑶采用双能X线骨密度仪、万能生物力学试验机、半定量基因测定和测尿DPD等方法，可以能够较准确地检测出骨代谢的情况。因此该方法在骨质疏松症的早期诊断中具有重要价值。
　　 ⑷中医药在防治骨质疏松症方面具有较大的潜力与优势。本实验初步证明淫羊藿苷对去卵巢大鼠引起的大鼠骨质疏松症具有较好的疗效，揭示它在骨质疏松症的预防或治疗中将有重要价值。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

第1章绪论

1.1骨质疏松概况

1.2骨质疏松的发病机制及分类

1.2.1基本理论

1.2.2骨质疏松的分类

1.3骨质疏松症的中医理论

1.3.1整体认识

1.3.2中医对骨质疏松症病因的认识

1.4传统治疗骨质疏松症的药物

1.4.1骨吸收抑制剂

1.4.2骨形成促进剂

1.4.3骨矿化剂

1.5淫羊藿防治骨质疏松研究概况

1.5.1淫羊藿的主要成分

1.5.2淫羊藿抗骨质疏松症的实验研究

1.5.3对骨代谢的影响

1.5.4临床研究

1.5.5淫羊藿防治骨质疏松存症在的问题

1.6常见动物骨质疏松模型的选择

1.6.1动物骨质疏松模型的概况

1.6.2常见动物骨质疏松模型

1.7骨质疏松检测指标

1.7.1骨形成生化指标

1.7.2骨吸收的生化指标

1.7.3尿钙定量或肌酐比值

1.7.4骨密度

1.7.5骨形态计量学方法

1.8展望

1.9本文的构思

第2章大鼠骨质疏松模型的建立与鉴定

2.1材料

2.1.1实验动物

2.1.2药品及仪器

2.2方法

2.2.1动物分组及造模

2.2.2给药方法

2.2.3子宫测重

2.2.4血清碱性磷酸酶(ALP)测定

2.2.5腰椎、股骨骨密度和骨组织学检测

2.2.6统计学处理

2.3结果

2.3.1 血清碱性磷酸酶有(ALP)变化

2.3.2骨密度测量

2.3.3骨组织学变化

2.3.4子宫重量测定

2.4讨论

第3章 淫羊藿苷对去势大鼠骨质疏松症影响的实验研究

3.1材料

3.1.1仪器和药品

3.1.2实验动物

3.2方法

3.2.1动物分组及造模

3.2.2给药方法

3.2.3样品采集与检测

3.2.4血清碱性磷酸酶(ALP)测定

3.2.5腰椎、股骨骨密度检测

3.2.6大鼠股骨组织学观察

3.2.7大鼠腰椎、股骨生物力学测定

3.2.8统计学处理

3.3结果

3.3.1大鼠血清ALP测定结果

3.3.2大鼠股骨、腰椎骨密度测定结果

3.3.3大鼠骨组织学观察

3.3.4大鼠股骨、腰椎生物力学测定结果

3.4讨论

3.4.1淫羊藿苷防治骨质疏松症的研究

3.4.2淫羊藿苷对去势大鼠血清ALP的影响

3.4.3淫羊藿苷对去势大鼠骨密度的影响

3.4.4淫羊藿苷对去势大鼠骨生物力的影响

第4章 淫羊藿苷对去势大鼠骨髓细胞OPG mRNA基因表达及尿DPD的影响

4.1材料

4.1.1主要仪器

4.1.2主要试剂

4.1.3试剂配制

4.1.4实验大鼠及分组

4.2方法

4.2.1动物造模与干预

4.2.2标本采集与检测

4.2.3统计学处理

4.3结果

4.3.1淫羊藿苷对去势大鼠骨髓细胞OPG mRNA基因表达的影响

4.3.2淫羊藿苷对去势大鼠尿脱氧吡啶酚(DPD)的影响

4.4讨论

结论、不足及展望

参考文献

致谢

附录A：攻读学位期间所发表的学术论文目录