两株不动杆菌的分离鉴定、石油降解功能及生物学特性研究

摘要

随着社会经济发展，人们对石油资源的需求量越来越大。在石油勘探、开采、运输以及储存过程中都存在不同程度的泄漏，对土壤造成严重污染。在众多石油污染修复技术中微生物修复由于成本低、修复效果好、不易引起二次污染而得到了广泛应用。目前微生物修复技术存在的主要问题之一是缺少高效、广谱、稳定、适应性强的菌种以及对修复技术的深入研究。
　　本论文采取油浓度梯度升高法，从不同地区石油污染土样中分离出具有石油降解作用的菌株75株，选取其中两株高效稳定的石油降解菌 JC3-1、YM122，通过形态特征观察、结合细菌生理生化特征、16SrDNA序列分析初步确定JC3-1为嗜油不动杆菌(Acinetobacter oleivorans)，YM122为鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。
　　对菌株 JC3-1、YM122的生长特性进行了研究：菌株 JC3-1、YM122均在28h后进入生长稳定期。JC3-1在温度为20℃～40℃、pH5.0～9.0条件下生长良好，耐盐度为3％，且最适生长温度30℃～40℃，最适初始pH为9.0，最适生长盐浓度为0%；菌株 YM122在温度为20℃～50℃、pH5.0～9.0条件下生长良好，耐盐度为6%，最佳生长温度为40℃，最适初始pH为6.0，最适生长盐度1%。两株菌具有较强的环境适应性。
　　采用重量法对两株不动杆菌的石油降解率进行测定，在浓度为4000 mg/L石油培养基中生长15d，菌株 JC3-1对石油的降解率达42.15%，YM122的降解率达63.44%。
　　采用凃板计数法研究菌株对不同有机物的利用情况，菌株JC3-1能够利用一定浓度的正戊烷、正己烷、十六烷、十八烷、苯、甲苯、二甲苯、萘、邻苯二酚、芘；菌株 YM122能够利用一定浓度的十二烷、十六烷、十八烷、邻苯二酚。通过对菌株十六烷的粘附测定发现：菌株 JC3-1对十六烷的粘附率为96.57%，YM122对十六烷的粘附率可达42.56%，远高于大肠杆菌（E. co i l)3.10%。
　　PCR扩增检测到菌株 JC3-1与 YM122均具有烷烃单加氧酶(alkane monooxygenase)、芳烃双加氧酶(aromatic-ring-hydroxylating dioxygenases)、联苯双加氧酶(b ip henyl d ioxygenase)、甲苯双加氧酶(to luene d ioxyge nase)、邻苯二酚双加氧酶(catechol-2,3-dioxygenase)、萘双加氧酶(naphthalene dioxygenase)与石油降解相关的酶。对芳烃双加氧酶基因进行了克隆和序列分析。

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附表索引

第1章 绪论

1.1 石油污染概述

1.2 石油污染生物修复及研究现状

1.3 石油降解菌研究现状

1.4 石油降解菌的分子生物学研究

1.5 本课题的研究意义、内容及创新点

第2章 石油降解菌的筛选及鉴定

2.1 实验材料及仪器

2.2 实验方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

第3章 石油降解菌的生长特性

3.1 实验材料及仪器

3.2 实验方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第4章 石油降解菌降解特性及降解酶基因的研究

4.1 常用石油降解率的测定方法及比较

4.2 实验材料及仪器

4.3 实验方法

4.4 结果与分析

4.5 讨论

第5章 石油降解菌芳烃双加氧酶基因的克隆

5.1 实验材料

5.2 实验方法

5.3 结果与分析

5.4 讨论

结论

参考文献

致谢

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