成都地区儿童脓疱疮皮损中金黄色葡萄球菌药敏及随机扩增多态性DNA指纹分析

摘要

目的:对成都地区儿章脓疱疮皮损分泌物进行细菌的分离、培养、鉴定。先将鉴定出的金黄色葡萄球菌进行药敏试验,再将金黄色葡萄球菌的敏感株及耐药株分别进行随机扩增多态性DNA指纹分析,最后将金黄色葡萄球菌的敏感株与耐药株的随机扩增多态性DNA指纹进行对比分析。
　　 方法:对178例成都地区儿章脓疱疮患者皮损分泌物进行细菌培养,对培养出的162株金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)进行21种抗生素的药物敏感试验,同时,对162株SA进行随机扩增多态性DNA指纹对比分析。
　　 结果:178例儿童脓疱疮皮损分泌物中分离出180株细菌,包括金黄色葡萄球菌162株(90.00％),A组化脓性链球菌4株(2.22％),鲍曼小动杆菌4株(2.22％),肺炎克雷伯4株(2.22％),凝固酶阴性葡萄球菌2株(1.11％),阴沟杆菌2株(1.11％),粪肠球菌1株(0.56％),副血链球菌1株(0.56％),其中,2例患儿皮损中同时分离到金黄色葡萄球菌和A组化脓性链球菌(1.11％)。162株金黄色葡萄球菌中,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Meticillin-sensitiveStaphylococcusaureus,MSSA)148株(91.36％),耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Meticillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA)14株(7.64％)。
　　 162株金黄色葡萄球菌进行21种抗生素药敏实验,敏感率由高到低的药物依次为米诺环素(100％)、替考拉宁(100％)、喹奴普汀(100％)、万古霉素(100％)、呋喃妥因(100％)、左氧氟沙星(98.92％)、夫西地酸(98.92％)、利福平(97.31％)、诺氟沙星(94.62％)、氨苄西林舒巴坦(93.54％)、头孢噻肟(92.60％)、头孢唑啉(92.60％)、头孢呋辛(91.98％)、庆大霉素(90.12％)苯唑西林(89.51％)、四环素(85.19％)、氯霉素(82.10％)、复方新诺明(15.43％)、克林霉素(15.43％)、红霉素(6.17％)、青霉素(0.62％)。
　　 162株金黄色葡萄球菌进行21种抗生素药敏实验,耐药率由高剑底的药物依次为,青霉素(99.38％)、红霉素(93.83％)、克林霉素(84.57％)、复方新诺明(84.57％)、四环素(14.81％)、氯霉素(11.73％)、苯唑西林(10.50％)、庆大霉素(9.26％)、头孢唑啉(8.40％)、头孢噻肟(8.40％)、头孢呋辛(8.02％)、氨苄西林舒巴坦(5.55％)、诺氟沙星(4.32％)、左氧氟沙星(1.23％)、利福平(0.62％)。其中,夫西地酸、呋喃妥凶、万古霉素、喹奴普汀、替考拉宁及米诺环素均未显示耐药。
　　 148株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌对21种抗生素敏感率由高到低依次为,米诺环素(100％)、替考拉宁(100％)、喹奴普汀(100％)、万古霉素(100％)、呋喃妥因(100％)、头孢噻肟(100％)、头孢唑啉(100％)、氨苄西林舒巴坦(99.32％)、头孢呋辛(99.32％)、左氧氟沙星(98.65％)、夫西地酸(98.65％)、利福平(97.97％)、苯唑西林(97.97％)、诺氟沙星(93.24％)、庆大霉素(89.86％)、氯霉素(86.48％)、四环素(85.81％)、克林霉素(16.22％)、复方新诺明(15.54％)、红霉素(6.76％)、青霉素(0.68％)。
　　 148株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌对21种抗生素耐药率由高剑低依次为青霉素(99.32％)、红霉素(93.24％)、复方新诺明(84.46％)、克林霉素(83.78％)、四环素(14.19％)、庆人霉素(9.46％)、氯霉素(8.11％)、诺氟沙星(4.73％)、苯唑西林(2.03％)、左氧氟沙星(1.35％)、头孢呋辛(0.68％)、利福平(0.68％)。其中,夫西地酸、氨苄西林舒巴坦、头孢唑啉、头孢噻肟、呋喃妥因、万古霉素、喹奴普汀、替考拉宁、米诺环素均未显示耐药。
　　 14株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对21种抗生素敏感率由高到低依次为米诺环素(100％)、替考拉宁(100％)、喹奴普汀(100％)、万古霉素(100％)、呋喃妥因(100％)、左氧氟沙星(100％)、夫西地酸(100％)、利福平(100％)、诺氟沙星(100％)、庆大霉素(92.86％)、四环素(78.57％)、氨苄西林舒巴坦(35.71％)、氯霉素(35.71％)、头孢噻肟(14.29％)、头孢唑啉(14.29％)、头孢呋辛(14.29％)、复方新诺明(14.29％)、克林霉素(7.15％)。其中,苯唑西林、红霉素、青霉素均显示耐药。
　　 14株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对21种抗生素耐药率由高到低依次为青霉素(100％)、红霉素(100％)、苯唑西林(100％)、克林霉素(92.86％)、头孢噻肟(85.71％)、头孢唑啉(85.71％)、头孢呋辛(85.71％)、复方新诺明(85.71％)、氨苄西林舒巴坦(64.29％)、氯霉素(57.14％)、四环素(21.43％)及庆大霉素(7.14％)。其中,米诺环素、替考拉宁、喹奴普汀、万古霉素、呋喃妥因、左氧氟沙星、夫西地酸、利福平及诺氟沙星均未显示耐药。
　　 成都地区儿童脓疱疮皮损中分离到的148株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌与14株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对21种抗生素的耐药率经统计学分析,差异有统计学意义(t=2.866,P＜0.05),成都地区儿童脓疱疮男性与女性患儿皮损中分离到的金黄色葡萄球菌对21种抗生素耐药率经统计学分析,差异无统计学意义(t=0.639.P＞0.05)。
　　 对162株金黄色葡萄球菌进行随机扩增多态性DNA指纹分析(RandomlyAmplifledPolymorohicDNA,RAPD),获得DNA扩增产物5～11个条带,条带分子量大小250bp～2000bp,共分为8种基因型,即,基因型Ⅰ为3株(1.85％),基因型Ⅱ为43株(26.54％),基因型Ⅲ为51株(31.48％),基因型Ⅳ为7株(4.32％),基因型Ⅴ为10株(6.17％),基因型Ⅵ为42株(25.93％),基因型Ⅶ为3株(1.85％),基因型Ⅷ为3株(1.85％)。其中,以基因型Ⅲ、基因型Ⅱ及基凶型Ⅵ居多,这三种基因型占总数65.43％(106/162)。
　　 148株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌的基因型分别为:基因型Ⅰ为3株(2.03％),基因型Ⅱ为33株(22.30％),基因型Ⅲ为50株(33.78％),基因型Ⅳ为7株(4.73％),基因型Ⅴ为10株(6.76％),基因型Ⅵ为39株(26.35％),基因型Ⅶ为3株(2.03％),基因型Ⅷ为3株(2.03％)。其中,以基因型Ⅲ、基因型Ⅵ、基因型Ⅱ居多,这三种基因型占总数的82.43％(122/148)。
　　 14株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因型分别为:基因型Ⅱ10株、基因型Ⅵ3株、基因型Ⅲ1株。其中,以基因型Ⅱ为主,占总数的71.43％(10/14)、其次为基因型Ⅵ,占总数的21.43％(3/14)。
　　 结论:成都地区儿童脓疱疮皮损中病原菌以金黄色葡萄球菌为主(90.00％),对米诺环素、替考拉宁、喹奴普汀、万古霉素及呋喃妥因高度敏感(敏感率均为100％)。而对青霉素、红霉素、克林霉素及复方新诺明高度耐药(耐药率均在84.57％以上)。MSSA对头孢噻肟、头孢唑啉、头孢呋辛、氨苄西林舒巴坦高度敏感(敏感率分别为100％、100％、99.32％、99.32％),而MRSA对头孢噻肟、头孢唑啉、头孢呋辛、氨苄西林舒巴坦高度耐药(耐药率分别为85.71％、85.71％、85.71％、64.29％)。成都地区儿童脓疱疮皮损巾MRSA对21种抗生素的耐药率高于MSSA对。成都地区脓疱疮患儿中男性与女性对21种抗生素耐药率差异没有统计学意义。成都地区儿童脓疱疮皮损中162株金黄色葡萄球菌RAPD指纹分析,共分为8犁,以基因型Ⅲ最多,其次为基因型Ⅱ,再次为基因型Ⅵ,这三种基因型占总数65.43％(106/162)。148株MSSA基因型有8型,以基因型Ⅲ(50株,33.78％)、基因基因型Ⅵ(39株,26.35％)、基因型Ⅱ(33株,22.30％)居多,这三种基因型占总数的82.43％(122/148),14株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因型只有3型,分别为基因型Ⅱ10株(71.43％),基因型Ⅵ3株(21.43％),基因型Ⅲ1株(7.14％),以基因型Ⅱ为主。