藏药柳茶提取物对S180体内生长的抑制作用及抑瘤机制的实验研究

摘要

目的：观察藏药柳茶提取物对小鼠肉瘤S180在体内生长的抑制作用，并通过对荷瘤鼠脾淋巴细胞IL-2和TNF-α的产生及对肿瘤组织P53、Bcl-2基因表达的检测探讨其抑瘤机理，为该药的开发利用提供科学的理论依据。 方法：将清洁级昆明种小鼠60只，随机分为六组，每组10只：1)正常对照组，动物不接种肿瘤，以生理盐水灌胃，0.2ml/只/d；2)肿瘤对照组，接种肿瘤，以生理盐水灌胃，0.2ml/只/d；3)柳茶高剂量组，接种肿瘤，以6g向1的柳茶溶液灌胃，0.2ml/只/d；4)柳茶中剂量组，接种肿瘤，以3g/ml的柳茶溶液灌胃，0.2ml/只/d；5)柳茶低剂量组，接种肿瘤，以1.5g/m1的柳茶溶液灌胃，0.2ml/只/d；6)阳性对照组，接种肿瘤，每只以环磷酰胺20mg/kg/d腹腔注射给药。除正常对照组外，采用S180腹水型肉瘤细胞株建立小鼠肿瘤模型。实验过程中，观察小鼠的生存质量，活动和精神状况，皮毛光洁度，肿瘤生长的潜伏期，生长速度及局部肿块破溃情况。肿瘤生长14天后断颈处死，小心剥离肿瘤组织，并立刻称重后计算抑瘤率。用10％福尔马林固定，石蜡包埋，切片，常规HE染色，烘干，光镜下观察。采用免疫组织化学技术SABC法(链霉亲和素—生物素—过氧化物酶技术)测定肿瘤组织中P53和Bcl-2的表达。将剥离肿瘤组织后的小鼠在无菌条件下剥取脾脏，制备单个脾细胞悬液，用ELISA(酶联免疫吸附试验)双抗体夹心法测定荷瘤鼠脾淋巴细胞产生IL-2和TNF-a水平。结果：中、高剂量的柳茶对小鼠体内的Si80肉瘤生长有明显的抑制作用，抑瘤率分别达到了44.6％和40.0％；柳茶各剂量组肿瘤潜伏期较长，约5天方可触及肿块，表皮破溃出血现象较轻，小鼠精神状态及皮毛粗光泽度均好于肿瘤对照组。肿瘤对照组和低剂量组镜下见肿瘤细胞生长活跃，有部分坏死灶，病理性核分裂像较为多见；高、中剂量组和阳性对照组镜下可见多处瘤细胞的大片坏死现象，并见到大量肿瘤细胞出现核浓缩。中、高剂量的柳茶能促进IL-2和TNF-a分泌，IL-2与TNF-α的含量分别为76.100±4.557、80.400±4.719pg/ml和41.447±16.373、44.302±13.724pg/ml，与肿瘤对照组的差异具有统计学意义；中、高剂量的柳茶能下调mtP53基因在肿瘤组织中表达，阳性率为54％和52％；高剂量的柳茶能下调Bcl-2基因在肿瘤组织中表达，阳性率为82％，与肿瘤对照组的差异具有统计学意义。 结论：1.藏药柳茶提取物对小鼠移植性肿瘤S180在体内的生长具有显著的抑制作用。 2.其抑瘤作用与以下三个机制有关：1)在一定程度上引发肿瘤组织的坏死；2)促进荷瘤机体脾淋巴细胞分泌IL-2和TNF-a，提高机体肿瘤免疫能力；3)下调荷瘤鼠肿瘤组织中的mtP53基因和Bcl-2基因的表达，诱导肿瘤细胞的凋亡。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

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前言

第一部分藏药柳茶提取物对肿瘤体内生长抑制作用的实验观察

第二部分藏药柳茶提取物抑瘤机制探讨的实验研究

讨论

结论

附图

参考文献

致谢