硫酸镍致雌性小鼠卵巢早衰毒作用及其机制的实验研究

摘要

目的：探讨腹腔注射硫酸镍(NiSO<,4>)诱发雌性小鼠丘脑及卵巢损伤的毒作用及其机制，为研究镍毒性导致的卵巢早衰提供科学依据。 方法：昆明种健康雌性小鼠 48 只，按体重分层随机分为4组，染毒剂量的选择依据小鼠NiSO<,4>腹腔注射染毒LD<,50>(40mg/kg)的1/16、1/8、1/4的近似值进行：对照组(NS组)，染毒低、中、高剂量组(2.5、5.0、10.0mg/kg组)。对照组以生理盐水(NS)、染毒组以不同浓度硫酸镍溶液等比例，0.2ml/10g动物体重等体积腹腔注射，1次/d，连续12d。采用细胞贴片及HE组织病理切片观察小鼠丘脑及卵巢细胞形态学变化；用美篮染色法检测阴道上皮脱落细胞，观察小鼠动情周期变化；流式细胞仪检测分析小鼠丘脑及卵巢细胞增殖周期各时相细胞比例及DNA含量；免疫组织化学法测定小鼠卵巢P<,53>、P<,16>、Bcl-2蛋白的表达情况。 结果：(1)染毒组细胞贴片光学显微镜可观察到卵巢细胞凋亡的组织形态学变化；HE染色显示卵巢组织皮质变薄，间质增多，卵泡数量减少，部分血管扩张；细胞核染色质分布不均匀且有细胞碎片出现；HE切片中可见小鼠丘脑细胞体积增大肿胀，染色质疏松呈网状，嗜碱性减弱，细胞染色呈蓝色，有些细胞膜不完整，细胞核破碎内容物外溢，未见明显细胞凋亡形态学特征。(2)腹腔注射硫酸镍染毒可导致小鼠动情周期紊乱，染毒组小鼠动情间期延长且不规则。 (3)流式细胞仪对小鼠卵巢细胞周期研究结果显示：不同剂量组小鼠卵巢细胞增殖周期各期细胞分布呈现G<,0>/G<,1>期细胞阻滞和G<,2>/M、S期细胞比例下降；高剂量组G<,1>峰前出现凋亡峰(Ape峰)/亚二倍体峰(sub-G<,1>)，随剂量增加各组卵巢细胞凋亡率增加；细胞增殖指数(PI)降低；异倍体指数(D．I．)增加。(4)流式细胞仪对小鼠丘脑细胞增殖周期分析显示随染毒剂量增加，小鼠丘脑细胞呈现G<,0>/G<,1>期细胞阻滞和G<,2>/M、S期细胞比例下降；细胞增殖指数(PI)降低。(5)免疫组化结果显示P<,53>及Bcl-2蛋白的表达随染毒剂量增加而降低，各剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)，P<,16>蛋白的表达随染毒剂量增加而增高，各剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：腹腔注射硫酸镍染毒可诱发小鼠卵巢早衰，其机制与硫酸镍引起雌性小鼠丘脑一卵巢轴、生殖系统损伤有关；其损伤作用与硫酸镍调控细胞周期和诱导卵巢细胞凋亡有关；小鼠卵巢细胞凋亡可能与腹腔染毒NiSO<,4>引起卵巢细胞P<,53>、Bcl-2蛋白表达的下调及P<,16>蛋白表达的上调有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分硫酸镍对小鼠一般毒作用及对卵巢、丘脑、腹水细胞形态学的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分硫酸镍对小鼠丘脑及卵巢组织细胞周期的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

第三部分硫酸镍诱导小鼠卵巢细胞P53、P16、Bcl-2基因蛋白表达变化的研究

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

附录