FABP7超表达与RNAi真核表达载体对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

摘要

目的：观察FABP7超表达与RNAi真核表达载体对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响，从而为进一步研究FABP7基因的功能奠定基础。 方法：以FABP7的cDNA为模板，采用PCR方法获得FABP7基因的N端、C端和Link三个不同片段，双酶切后插入线性化的pcDNA3.1载体真核启动子下游，重组体经双酶切、PCR鉴定。将FABP7 cDNA不同片段的真核表达载体和前期构建的FABP7 cDNA及其siRNA的真核表达载体转染人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性，细胞计数绘制生长曲线，半定量RT-PCR检测FABP7 cDNA、FABP7 cDNA的不同片段和FABP7-siRNA的mRNA表达，流式细胞术检测MCF-7细胞的周期变化情况。 结果：双酶切、PCR鉴定表明成功地构建了针对FABP7 cDNA不同片段的真核表达载体；将重组质粒DNA转染人乳腺癌细胞株MCF-7细胞后，发现转染了pcDNA3.1-FABP7的细胞生长受到抑制，而转染了pcDNA3.1-N端、pcDNA3.1-C端、pcDNA3.1-Link和FABP7-siRNA的细胞增殖均有不同程度加快，其中，转染了pcDNA3.1-Link的细胞增殖加快较明显，有统计学意义(P＜0.05)；RT-PCR检测FABP7 cDNA的mRNA表达降低，FABP7 cDNA的不同片段和FABP7-siRNA的mRNA表达均有不同程度的增加；流式细胞术分析细胞周期变化，pcDNA3.1-FABP7组和pcDNA3.1-N端组的G1和G2期细胞增加，S期细胞减少，pcDNA3.1-C端组、pcDNA3.1-Link组和FABP7-siRNA组的G1和G2期细胞减少，S期细胞增加。 结论：成功地克隆了FABP7 cDNA的三个不同片段并构建其真核表达载体；FABP7 cDNA可抑制MCF-7细胞的增殖；而FABP7-siRNA可促进MCF-7细胞的增殖；FABP7 cDNA的不同片段也可不同程度地促进MCF-7细胞的增殖。初步探讨了FABP7基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。以上结果为进一步研究FABP7基因的功能奠定了基础。

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