小剂量阿糖胞苷联合Flt-3L、TPO诱导慢性粒细胞白血病细胞分化为浆细胞样树突状细胞及其功能研究

摘要

目的：浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cells，pDC)在体内作为树突状细胞(dendritic cells，DC)的一个亚型，发挥着重要的免疫学效应，是近来研究的热点。pDC在其不成熟的前体阶段，受到病毒或CpG寡聚多氧核苷酸(CpG ODNs)刺激后能产生大量的干扰素a(interferon-a，IFN-a)，发挥非特异的免疫学效应；在通过病毒、CpG ODN刺激或CD40L、IL-3作用分化成熟后，具有一定的抗原递呈功能而获得适应性免疫效应，是连接先天的非特异性免疫与后天获得性免疫的桥梁。在体外，通过FLT-3L联合TPO能够从造血干细胞(haemopoietic stem cell，HSC)成功培养出pDC，为人们研究其功能提供了方便。慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是造血干细胞的恶性增殖性疾病，患者体内存在着一系列的免疫学异常。IFN-a治疗CML疗效确切，能使一部分患者获得细胞遗传学缓解及分子生物学缓解。小剂量阿糖胞苷(low dose cytosineara binoside，LD-Ara-C)联合干扰素治疗的疗效明显优于单用干扰素治疗，所以我们设想是否LD-Ara-C在患者体内有改善免疫功能异常的作用，LD-Ara-C对CML源性的pDC的分化、成熟及功能是否有影响?因此，我们用LD-Ara-C联合FLT-3L、TPO培养CML源性的造血干细胞分化成为CML 性的pDC，来研究探讨LD-Ara-C治疗CML可能的免疫机制，为临床治疗提供理论依据。 方法：Ficoll密度梯度离心法分离初诊未治的CML患者骨髓单个核细胞(bonemarrow mononuclear cell，BMMNC)，将所得细胞分别加入不同剂量Ara-C(实验组A：5ng/mlAra-C；实验组B：10ng/mlAra-C；实验组C:25ng/mlAra-C；实验组D：50ng/mlAra-c)，并以不加Ara-C为对照组，同时加入Flt-3、TPO诱导培养25天；倒置显微镜及光镜观察pDC形态；流式细胞仪检测细胞表面标志(CD4，CD123，BDCA-2)；加入流感疫苗后ELISA法检测上清液中IFN-α浓度。 结果：CML-MNC在培养25天后，细胞聚集成簇，体积明显增大，胞浆丰富，具有浆细胞样细胞的形态；瑞氏-吉姆染色光镜下可见偏心的核，显示浆细胞样形态。流式细胞仪检测表明：p D C特征性表面分子(CD4，CD123，BDCA-2)的表达，实验组B和实验组A明显高于对照组，差异具有显著性(p<0.05)；其中实验组B高于实验组A(p<0.05)，实验组C细胞大部分死亡，实验组D细胞全部死亡。分泌IFN-α的量由强到弱分别为：实验组B>实验组A>对照组>实验组C，差异均有显著性(p<0.05)。 结论：LD-Ara-C联合Flt-3、TPO可以促使CML细胞诱导分化为pDc，增强其特征性表面分子表达，提高其经流感疫苗刺激后IFN-a的产量。提示LD-Ara-C可以增加体内pDC的量、也能增加内源性IFN-a的产生，LD-Ara-C的治疗作用与恢复CML患者体内pDC的量及功能有关。

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