JAK/STAT信号通路阻断剂AG490联合DDP对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响

摘要

目的：通过体内试验观察JAK/STAT通路阻断剂AG490联合化疗药物DDP对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响，探讨AG490通过阻断STAT3通路对人子宫颈癌裸鼠移植瘤生长抑制作用及与Caspase-3蛋白表达的关系。以期对临床上药物治疗与预防子宫颈癌寻找更加完善的途径。 方法：建立人子宫颈癌(Hela)细胞裸鼠异种移植瘤模型并分组。AG490单用或联合DDP处理各组裸鼠。用药期间测量裸鼠体重和肿瘤体积，检测瘤重计算抑瘤率。流式细胞分析术测肿瘤组织中细胞凋亡情况，免疫组化检测移植瘤组织中P-stat3和Caspase-3蛋白表达。所有数据均采用SPSS10.0统计软件进行处理。 结果： 1、药物对裸鼠移植瘤体积生长的影响：分别在用药后第1天、第4天、第7天及第10天测量肿瘤长径(a)、短径(b)，计算体积，描绘移植瘤生长曲线图。结果可见从用药第7天开始DDP组、AG490组以及联合用药组(DDP+AG490组)肿瘤体积均小于对照组，有显著性差异(P<0.001)。联合用药组与DDP组、AG490组比抑瘤作用显著增强(P<0.05、P<0.001)。DDP组对肿瘤的生长抑制与AG490组相比显著增强(P<0.05)。 2、药物对移植瘤裸鼠体重及副作用的影响：药物治疗子宫颈癌裸鼠移植瘤生长期间，从用药第7天开始，顺铂组和联合用药组与对照组比差异有统计学意义(P<0.001)。AG490组与对照组比差异无统计学意义(P>0.05)且裸鼠一般情况良好，进食和体重无明显变化。DDP组于治疗开始后第7天裸鼠逐渐出现严重消瘦，营养不良，并且出现明显食欲减退，活动迟缓，皮肤无光泽等毒副反应，体重变化与联合用药组间存在明显差异(P<0.05)，该组有1只裸鼠死亡。 3、各组裸鼠移植瘤瘤重的变化：处死裸鼠，剥出瘤块用电子天平称量瘤重(W)，计算抑瘤率。抑瘤率分别为对照组0％、顺铂组51.2％、AG490组33.6％、联合用药组59.2％与对照组相比，各药物作用组均对裸鼠移植瘤有抑制作用，差异有显著性意义(P<0.05)。AG490与DDP联合应用比两者单独应用抑瘤作用更明显，差异有显著性意义(P<0.05)。DDP组比AG490组抑瘤作用强，差异有统计学意义(P<0.05)。 4、流式细胞仪分析凋亡率：DDP组、AG490组和联合用药组有明显G1期形成的凋亡峰，三个用药组的凋亡率分别是52.1±1.3％、39.5±0.4％、66.7±1.8％。与对照组10.2±2.4％相比均有显著性差异(P<0.05)。流式细胞分析的各组DNA组方图，可见各用药组有明显的G1期形成的凋亡峰。 5、光学显微镜下观察Hela细胞裸鼠移植瘤组织形态学的改变：肉眼观移植瘤呈结节状，肿瘤组织血供丰富，无明显周围组织和皮肤浸润，界限清楚，易分离，切面呈鱼肉样。光镜下观察肿瘤细胞呈巢、片、条索状排列，瘤细胞体大、核大深染，核仁明显，病理性核分裂相易见，瘤周组织内血管扩张充血，并有少量淋巴细胞、中性粒细胞浸润，瘤巢之间有少量的纤维及血管。瘤组织内见小灶性凝固性坏死。用药后，肿瘤组织出现不同程度的坏死。肿瘤细胞平均坏死率为：对照组21.8±9.0％、A6490组39.4±11.3％、DDP组40.8±7.3％、联合用药组61.9±9.6％，各组与对照组差异有统计学显著意义(P<0.05)，联合用药组与AG490组、DDP组差异有统计学意义(P<0.05)。 6、免疫组化结果：P-stat3的阳性表达主要位于宫颈癌细胞的胞浆内，染色较深，散在分布，Caspase-3的阳性表达亦位于胞浆内，散在或灶性分布。各组阳性率依次为：P-STAT3对照组92.5％；DDP组64％；AG490组55％；联合用药组40.9％；Caspase-3对照组30.4％；DDP组60％；AC490组55.6％；联合用药组92.3％；在AG490组中，P-stat3蛋白与Caspase-3蛋白的表达无负相关性(r=-0.074，P>0.05) 结论： 1、AG490能抑制人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的生长，还可以增加顺铂对宫颈癌的药物敏感性，降低顺铂化疗的毒副作用，与顺铂联合应用抑制作用明显增强。 2、A6490能诱导移植瘤细胞凋亡，与顺铂联合应用后其凋亡效应增强。 3、AG490与顺铂联合应用能降低移植瘤中P-stat3的表达，间接上调Caspase-3表达。

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