滤泡性淋巴瘤BCL-2/IgH基因重组腺病毒穿梭质粒的构建与鉴定

摘要

目的：构建具有感染性的人特异性肿瘤BCL-2/IgH基因的重组腺病毒5型穿梭质粒，为制备表达BCL-2/IgH基因的重组腺病毒奠定基础。
　　方法： TRIZOL法从DoHH2细胞中提取总RNA，RT-PCR法获取BCL-2/IgH融合基因，测序获得BCL-2/IgH融合基因序列，经过NCBI blast后，查找Genebank中的BCL-2基因和IgH基因序列号，结合上面的测序结果，确定包含有BCL-2基因CDS的BCL-2/IgH基因序列，通过化学方法全基因合成得到 BCL-2/IgH目的基因，将BCL-2/IgH目的基因装载到pUC57-Amp质粒，双酶切后与经过同样处理的5型腺病毒穿梭质粒pDC316连接，即构建成pDC316-BCL-2/IgH质粒；行双酶切及测序鉴定。
　　结果：
　　（1）本实验提取BCL-2/IgH目的基因，直接核苷酸序列分析t（14；18）连接处PCR产物，结果显示DoHH2细胞株在J6和BCL-2 MBR有一个j-bcl-2的序列。
　　（2）本实验成功将BCL-2/IgH目的基因亚克隆到pUC57-Amp通用载体，为进一步将外源性目的基因装载到腺病毒载体做准备。
　　（3）BCL-2/IgH目的基因成功构建入5型腺病毒穿梭质粒pDC316中，测序鉴定与Genebank中的序列一致。
　　结论：
　　（1）本实验成功构建与鉴定 pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒，为下一步制定表达BCL-2/IGH基因的重组腺病毒奠定基础。
　　（2）本实验成功构建与鉴定 pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒，为研究 BCL-2/IgH阳性肿瘤的基因免疫靶向治疗提供了基因传递的载体奠定基础。
　　（3）本实验成功构建与鉴定 pDC316-BCL-2/IgH穿梭质粒，为套细胞淋巴瘤特异性CCND1/IgH融合基因的靶向性基因治疗研究奠定基础。

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前言

1 材料

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 主要仪器及设备

2 方法

2.1 主要技术路线

2.2 实验方法

3 结果

3.1 RT-PCR获取BCL-2/IgH目的基因

3.2 pUC57-Amp-BCL-2/IgH质粒构建及鉴定

3.3 穿梭质粒pDC316-BCL-2/IgH构建及鉴定

4 讨论

5 结论

参考文献

综述: 滤泡性淋巴瘤的发病机制与治疗的研究进展

致谢

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