Urocortin I后处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体通透性转换孔及凋亡蛋白Bax、Bcl-2的影响

摘要

目的：观察Urocortin I后处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体通透性转换孔及凋亡蛋白Bax、Bcl-2的影响，探究Urocortin I后处理产生心肌保护效应的线粒体机制。
　　方法：利用离体心脏灌注装置（MPA）分离成年大鼠心肌细胞，将培养24h后的细胞随机分为正常组（Nor组）、缺氧/复氧组（HR组）、UrocortinⅠ后处理组（UcnⅠ组）、5-羟葵酸拮抗UrocortinⅠ组（5-HD+UcnⅠ组）。按下述实验条件进行处理：Nor组：37℃培养箱中持续培养150min；HR组：缺氧40min后，复氧110min；UcnⅠ后处理组：缺氧40min后复氧10 min，然后在含Uc nⅠ的培养基中处理30 min后再复氧70min；5-HD+Uc nⅠ组：在给予UcnⅠ处理前先用特异性线粒体ATP敏感性钾通道（mitoKATP）拮抗剂5-HD处理10min，余处理同UcnⅠ组。于复氧末对比观察各组细胞（1）倒置相差显微镜下线粒体通透性转换孔(mPTP)的变化；（2）倒置相差显微镜下线粒体膜电位(MMP)的变化；（3）倒置相差显微镜下活性氧自由基(ROS)的变化；（4）Western-Blot法检测各组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达水平；（5）CCK-8试剂盒检测各组细胞活力。
　　结果：1. mPTP及ROS的变化：Nor组心肌细胞mPTP及ROS荧光强度较其余各组低（P＜0.01）；Ucn I组及5-HD+Ucn I组较HR组低（P＜0.01），但5-HD+Ucn I组高于Ucn I组（P＜0.01）。
　　2.MMP的变化：Nor组心肌细胞MMP荧光强度较其余各组高（P＜0.01）；Ucn I组虽低于Nor组，但高于HR组及5-HD+Ucn I组（P＜0.05）；5-HD+Ucn I组与HR组差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　4.Bax、Bcl-2蛋白表达水平：Nor组心肌细胞Bax蛋白表达水平较其余各组低，而Bcl-2蛋白表达水平较其余各组高（P＜0.01）；Ucn I组Bax蛋白表达水平低于HR组及5-HD+Ucn I组（P＜0.05），而Bcl-2蛋白表达水平高于HR组及5-HD+Ucn I组（P＜0.05）；5-HD+Ucn I组与HR组相比Bax与Bc l-2蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　5.细胞活力的变化：Nor组心肌细胞活力较其余各组高（P＜0.01）；Ucn I组虽较Nor组低，但高于HR组及5-HD+Ucn I组（P＜0.05），而5-HD+Ucn I组与H/R组差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：Ucn I后处理能够保护缺氧复氧后心肌细胞的活力，产生一定的心肌保护效应，可能与其能开放mitoKAT P通道，减少ROS产生以保护膜的完整性，进而抑制mPTP开放，保护MMP，避免Bax等促凋亡蛋白的释放有关。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 实验材料

1 .1 实验动物

1 .2 主要仪器

1 .3 主要实验试剂

1.4 液体配置

2. 实验方法

2 . 1 成年SD大鼠心肌细胞分离

2.2 实验分组

2.3实验方案

2.4 心肌细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)检测

2.5 心肌细胞线粒体膜电位(MMP)检测

2.6 心肌细胞活性氧自由基(ROS)检测

2.7 Western-Blot法检测心肌细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达

2.8 心肌细胞活力检测

3. 统计学方法

4 结果

4.1 成年SD大鼠心肌细胞分离结果

4.2 心肌细胞线粒体通透性转换孔(mPTP)结果

4.3 心肌细胞线粒体膜电位(MMP)结果

4.4 各组心肌细胞活性氧自由基(ROS)结果

4.5 凋亡蛋白Bax、Bcl-2结果

4.6 各组心肌细胞活力结果

5 讨论

1、Uro c ortin I后处理对心肌细胞线粒体通透性转换孔的影响

2、Uro c o rtin I后处理对心肌细胞线粒体膜电位的影响

3、Uro c o rtin I后处理对心肌细胞活性氧自由基的影响

4、Uro c ortin I后处理对心肌细胞凋亡蛋白的影响

4 结论

参考文献

综述:线粒体通透性转换孔在后处理抗心肌缺血再灌注损伤中作用的研究进展

致谢

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