雌、孕激素及雌激素受体拮抗剂对人子宫内膜样癌JEC细胞中ER、PR、P57kip2表达影响的研究

摘要

本文对雌、孕激素及雌激素受体拮抗剂对人子宫内膜样癌JEC细胞中ER、PR、P57kip2表达影响进行了研究。本研究分为两个部分：
　　第一部分：雌、孕激素对人子宫内膜样癌JEC细胞中ER、PR、P57kip2表达影响的研究。
　　目的：研究雌、孕激素对人子宫内膜样癌（endometrioid carcinoma,EC）JEC细胞中雌激素受体（estrogen receptor, ER）亚型ERα、ERβ，孕激素受体（progesterone receptor, PR）亚型PR-A、PR-B，及p57kip2蛋白表达的影响，以探讨女性激素调控、细胞周期调控与EC发生发展之间的关系。
　　方法：实验组：分别用三种不同浓度的雌二醇（β-estradiol, E2）（10-6 mol/L、10-8 mol/L、10-10 mol/L）、孕酮（Progesterone, P）（10-4 mol/L、10-6 mol/L、10-8 mol/L）干扰体外培养的JEC细胞（中分化EC细胞）；对照组：用不含药物的等量培养基培养JEC细胞。分别培养24、48、72、96h后，用MTT法观察JEC细胞的生长情况；培养24、48、72h后，在光镜、电镜下观察JEC细胞的生长情况及超微结构变化，用免疫蛋白印迹（Western Blot, WB）法检测JEC细胞中ERα、ERβ、PR-A、PR-B、p57kip2蛋白的表达情况。
　　结果：⑴随着E2、P干扰时间的延长，对照组与实验各组JEC细胞均逐渐增长（P<0.05）。E2三种浓度均可促进JEC细胞的生长，且随药物浓度的增高促进作用更明显（P<0.05）；P低、中浓度组可促进JEC细胞的生长，高浓度组则抑制JEC细胞的生长（P<0.05）。⑵培养72h后，对照组JEC细胞呈多边形、长梭形、不规则形，可见腺腔样结构,伴少量细胞凋亡。与对照组比较，E2各浓度组细胞密度均明显增加，以高浓度组最甚；P低、中浓度组细胞密度明显增加，高浓度组则减小。各组细胞形态变化不明显。⑶培养72h后，对照组JEC细胞呈圆形或椭圆形，表面有微绒毛，胞质中可见分泌泡、线粒体、内质网、高尔基复合体等细胞器，还可见次级溶酶体，核呈不规则形，核仁明显。与对照组比较，E2各浓度组部分细胞分泌泡不明显、内质网肿胀，可见自噬现象，中、高浓度组细胞表面微绒毛肿胀，尤以高浓度组最明显；P各浓度组胞质内均可见自噬现象，高浓度组细胞表面微绒毛及胞质内分泌泡均增多。⑷三种不同浓度E2、P干扰后，对照组及实验各组JEC细胞均无ERα、PR-A、PR-B蛋白的表达，ERβ与p57kip2蛋白有不同程度表达。E2干扰后ERβ、p57kip2蛋白的表达情况：随着E2干扰时间的延长、作用浓度的增加，ERβ蛋白表达增加，p57kip2蛋白表达降低（P<0.05）。ERβ蛋白、p57kip2蛋白表达之间具有负线性相关关系。P干扰后ERβ、p57kip2蛋白的表达情况：相同作用时间比较：随着药物作用浓度的增高，ERβ蛋白在24、72h表达逐渐增加，在48h高浓度组表达最高，中浓度组表达最低（P<0.05）；p57kip2蛋白随着药物作用浓度的增高表达增高（P<0.05）。相同作用浓度比较：随着P干扰时间延长，高浓度组ERβ蛋白表达逐渐增高，低、中浓度组在72h表达最高，在48h表达最低（P<0.05）；p57kip2蛋白随P干扰时间的延长表达增高（P<0.05）。ERβ蛋白、p57kip2蛋白表达之间无相关关系。
　　结论：EC的生长、分化均可能受到女性激素及细胞周期的调控。E2可能通过上调JEC细胞中ERβ蛋白的表达、抑制p57kip2蛋白的表达，以解除p57kip2负向调控细胞周期进程的作用，明显促进JEC细胞的生长，并使其向更差的分化方向发展；P可上调JEC细胞中ERβ、p57kip2蛋白的表达，浓度较低时以ERβ蛋白促细胞生长的作用为主，浓度较高时则以p57kip2蛋白阻滞细胞周期进程的作用为主导，使肿瘤细胞向较好的分化方向发展；JEC细胞均不表达ERα、PR-A、PR-B蛋白，且E2、P均无法诱导其表达。联合检测ERα、ERβ、PR-A、PR-B、p57kip2蛋白在EC中的表达情况，可能更有利于评估EC的发生发展。
　　第二部分：雌激素受体拮抗剂对人子宫内膜样癌JEC细胞中ER、PR、P57kip2表达影响的研究。
　　目的：研究雌激素受体拮抗剂对人子宫内膜样癌（endometrioid carcinoma,EC）JEC细胞中雌激素受体（estrogen receptor, ER）亚型ERα、ERβ，孕激素受体（progesterone receptor, PR）亚型PR-A、PR-B，以及p57kip2蛋白表达的影响，以进一步探讨雌激素调控、细胞周期调控与EC发生发展之间的关系。
　　方法：实验组：分别用两种ER拮抗剂【他莫昔芬（Tamoxifen，TAM）（10-6mol/L），氟维司群（Fulvestrant，ICI182780）（10-6mol/L）】及雌二醇（β-Estradiol, E2）（10-6mol/L）干扰体外培养的JEC细胞（中分化EC细胞）；对照组：用不含药物的等量培养基培养JEC细胞。分别培养24、48、72、96h后，用MTT法观察JEC细胞的生长情况；培养24、48、72h后，在光镜、电镜下观察JEC细胞的生长情况与超微结构变化，用免疫蛋白印迹（Western Blot, WB）法检测JEC细胞中ERα、ERβ、PR-A、PR-B、p57kip2蛋白的表达情况。
　　结果：⑴随着药物干扰时间的延长，对照组与实验各组JEC细胞均逐渐增长（P<0.05）。与对照组比较，E2组细胞增殖能力增强（P<0.05），ICI182780组细胞增殖能力降低（P<0.05），TAM组细胞增殖能力增强（P>0.05）；与E2组比较，E2+ICI182780组细胞增殖能力降低（P<0.05），E2+TAM组细胞增殖能力降低（P>0.05）。⑵培养72h后，对照组JEC细胞呈多边形、长梭形、不规则形，可见腺腔样结构，伴少量细胞凋亡。与对照组比较，E2组细胞密度增大，ICI182780组细胞密度减小，其他各组细胞密度变化不明显；与E2组比较，E2+TAM组与E2+ICI182780组细胞密度均减小；各组细胞形态变化不明显。⑶培养72h后，对照组JEC细胞呈圆形或椭圆形，表面有微绒毛，胞质中可见线粒体、内质网、高尔基复合体等细胞器，还可见次级溶酶体，分泌泡不明显，偶见脂滴；核呈不规则形，核仁明显。与对照组比较，E2组细胞病理性核分裂象易见；ICI182780组部分细胞胞质中自噬现象增多。与E2组比较，E2+TAM组与E2+ICI182780组细胞病理性核分裂象少见。⑷对照组及实验各组JEC细胞均无ERα、PR-A、PR-B蛋白的表达，ERβ与p57kip2蛋白有不同程度的表达。ER拮抗剂干扰后ERβ蛋白的表达情况：相同作用时间比较：与对照组比较，ERβ蛋白在E2组表达增加，在TAM组与ICI182780组表达均减少，且ICI182780组减少更明显（P<0.05）。与E2组比较，ERβ蛋白在E2+TAM组与E2+ICI182780组表达均减少，且E2+ICI182780组减少更明显（P<0.05）。相同药物分组比较：随着药物作用时间的延长，ERβ蛋白在E2组表达增加，在TAM组与ICI182780组表达减少（P<0.05）。ER拮抗剂干扰后p57kip2蛋白的表达情况：相同作用时间比较：与对照组比较，p57kip2蛋白在E2组表达减少，在TAM组与ICI182780组表达增加，且ICI182780组增加更明显（P<0.05）。与E2组比较，p57kip2蛋白在E2+TAM组与E2+ICI182780组表达均增加，且E2+ICI182780组增加更明显（P<0.05）。相同药物分组比较：随着药物作用时间的延长，p57kip2蛋白在E2组表达减少，在TAM组与ICI182780组表达增加（P<0.05）。TAM与ICI182780干扰后， ERβ蛋白、p57kip2蛋白表达之间均具有负线性相关关系。
　　结论：ICI182780有较强的拮抗雌激素的作用，可能通过下调JEC细胞中ERβ蛋白的表达，诱导p57kip2蛋白的表达增加，发挥其阻滞细胞周期进程的作用，抑制肿瘤细胞的生长；TAM有较弱的拮抗雌激素的作用，对JEC细胞的生长有较弱的促进作用，可能TAM在JEC细胞中发挥ER拮抗剂作用的同时，也发挥较弱的雌激素样作用。JEC细胞均不表达ERα、PR-A、PR-B蛋白，且TAM、ICI182780均无法诱导其表达。在JEC细胞中，ICI182780比TAM拮抗雌激素的作用更强，可能更适合用于EC患者的内分泌治疗。这对EC患者内分泌治疗药物的选择有重要参考价值。

目录

声明

中英文缩略词表

第一部分雌、孕激素对人子宫内膜样癌JEC细胞中ER、PR、P57kip2表达影响的研究

前言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

第二部分雌激素受体拮抗剂对人子宫内膜样癌JEC细胞中ER、PR、P57kip2表达影响的研究

前言

1 材料与方法

2. 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述：ER、PR、p57kip2在肿瘤中的研究进展

致谢

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