益生性唾液乳杆菌的筛选及其抑菌物质和粘附作用的初步探究

摘要

目的：本研究旨在从健康人群口腔中筛选具有益生潜能的唾液乳酸杆菌，为益生菌用于口腔疾病的防治做出初步探究。
　　方法：
　　1.取身体健康且无口腔疾病的志愿者的非刺激性唾液并使用LBS固体培养基进行选择性培养，筛选得到乳白色圆形菌落，分别挑取形状大小不一的各菌落进行单克隆培养，经革兰染色鉴定、16srDNA测序、NCBI((National Center for Biotechnology Information)对比分析得到唾液乳杆菌菌株（Lactobacillus salivarius），将纯化后的唾液乳酸杆菌菌株在液体MRS培养基中液体培养，取其无菌发酵液上清对指示菌变形链球菌（streptococcus mutans,SM）UA159进行抑制实验，筛选出抑菌效果最显著的菌株作为本实验的目标菌株并命名。
　　2.取目标菌株的无菌发酵液上清进行抑菌物质的有效抑菌浓度、对热的稳定性、对蛋白酶的敏感性以及抑菌物质的广谱性等多方面的分析。
　　3.以变形链球菌UA159为指示菌，将其与目标菌株以不同的浓度在盖玻片上共培养48h，光学显微镜及扫描电镜下观察其粘附状况，初步研究目标菌株与变形链球菌UA159的体外粘附能力。
　　结果：
　　1.本实验成功筛选出4株具有不同基因型的唾液乳酸杆菌，其对变形链球菌UA159有着不同的抑制作用，将抑菌作用最强的唾液乳酸杆菌菌株作为目标菌株并命名为w22a。
　　2.(1) w22a无菌发酵液上清中的抑菌物质被稀释至原浓度的1/3时其抑菌作用不太明显，抑菌圈直径与空白对照组相比无统计学差异（P>0.05），但随着发酵上清液中抑菌物质浓度的增加其抑菌作用开始增强。(2)将无菌发酵液上清进行60℃-90℃梯度温度处理后发现其对变形链球菌UA159的抑制作用未受影响，各组间无显著性差异（P>0.05）。(3)将无菌发酵上清液经过氧化氢酶及多种广谱蛋白酶处理后发现抑菌物质的抑菌作用出现了不同程度的破坏，其中蛋白酶 K的破坏作用最强。（4）无菌发酵液上清中的抑菌物质对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌DH5α、白色念珠菌ATCC10231、嗜酸乳杆菌ATCC4356等口腔常见的致病菌有着程度不一的抑制作用（P<0.01），其中抑菌物质对大肠杆菌DH5α的抑制作用最为显著。
　　3.与变形链球菌UA159相比。w22a在体外模拟实验中有着更高的粘附率，并在一定浓度时能够抑制变形链球菌的生长。
　　结论：本研究从健康人群唾液中成功筛选出具有口腔益生潜能的唾液乳酸杆菌w22a。其产出的抑菌物质对热稳定，对多种广谱蛋白酶敏感并能够对多种口腔常见致病菌有着不同的抑制作用。另外，w22a来源于口腔，能够对口腔环境有着良好的适应性。因此，其是一株有口腔益生潜能的唾液乳杆菌，具有一定的研究价值及应用前景。

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英文摘要

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第一章 前言

第二章 研究内容及目的

2.1 研究目的

2.2 研究内容

第三章 材料和方法

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 统计学方法

第四章 研究结果

4.1益生性唾液乳酸杆菌的筛选结果

4.2 目标菌株所产抑菌物质的初步研究及分析

4.3 w22a与UA159体外粘附实验结果

第五章 讨论

5.1益生性唾液乳酸杆菌的筛选

5.2抑菌物质的初步研究

5.3 w22a与UA159的体外粘附实验

5.4 关于本实验的几点思考及展望

第六章 结论

参考文献

中英文缩略词对照表

攻读学位期间的学术研究成果

一、在学期间发表论文

二、参与课题的项目名称

致谢