c-FLIP在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达及意义

摘要

目的：
　　使用链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型，探讨细胞型Fas相关死亡域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白（c-FLIP）在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达以及c-FLIP介导坏死性凋亡通路在糖尿病肾病发病机制中的作用。
　　方法：
　　雄性成年SD大鼠，标准化喂养。实验分为糖尿病肾病模型组（DN）和正常对照组（NC），DN组采用链脲菌素（STZ）55mg/Kg腹腔注射造模，每组2、4、8、12、16周5个观察点，每个时点6只大鼠。处死前采取血液、尿液标本，检测血糖、血清肌酐、血清尿素氮和24小时尿蛋白定量；肾脏石蜡切片作普通病理；免疫组化、免疫印迹（WB）测定肾组织中c-FLIP、受体交互作用蛋白1（RIP1）和受体交互作用蛋白3（RIP3）表达，RT-PCR测定肾组织的c-FLIP、RIP1及RIP3 mRNA相对表达量。并分析各指标之间的相关性。
　　结果：
　　1.血、尿指标：1）血糖：DN组不同时间点血糖比NC组明显增加（P＜0.01）。2）24小时尿蛋白：①DN组不同时间点尿蛋白比NC组明显增加（P＜0.01）。②DN组尿蛋白(P<0.01)随时间不断增加，差异有统计学意义(P<0.01)。3）肾功能：①DN组不同时间点血清肌酐及尿素氮比NC组明显增加（P＜0.01）。②DN组血清肌酐及尿素氮差异均无统计学意义（P＞0.05）。
　　2.肾脏病理：①DN组大鼠肾脏发白、肿大，可见不同程度的肾小球肥大、细胞数增多、系膜基质增多、部分肾小管扩张及空泡样变性。②DN组不同时间点肾重指数比NC组明显增加（P＜0.01）。③DN组肾重指数随时间不断增加，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　3.免疫组化：①c-FLIP主要表达于肾小球和肾小管细胞中；DN组不同时间点c-FLIP的表达量比NC组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01）；DN组c-FLIP表达量不同时间点比较，均为2W与4W相比差异无统计学意义，8W、12W、16W显著低于2W和4W，差异有统计学意义(P<0.01)，8W与12W相比差异无统计学意义,16W显著低于8W和12W，(P<0.01)。②RIP1和RIP3也是主要表达于肾小球细胞中；DN组RIP1和RIP3不同时间点比NC组明显增加（P＜0.01）；DN组以上两个指标表达量不同时间点比较，均为2W与4W相比差异无统计学意义，8W、12W、16W显著高2W和4W，差异有统计学意义(P<0.01)，8W与12W相比差异无统计学意义，16W显著高于8W和12W，差异有统计学意义(P<0.01或P＜0.05)。③DN组c-FLIP蛋白表达量与RIP1、RIP3呈显著负相关(r=-0.933,P＜0.01;r=-0.954,P＜0.01),与尿蛋白、肾重指数、血清肌酐及尿素氮均也呈负相关(r=-0.945,P＜0.01;r=-0.922,P＜0.01;r=-0.543,P＜0.01;r=-0.494,P＜0.01)。
　　4.免疫印迹：①DN组不同时间点c-FLIP的表达量比NC组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01）；DN组c-FLIP表达量不同时间点比较，均为2W与4W相比差异无统计学意义，8W、12W、16W显著低于2W和4W，差异有统计学意义(P<0.01)，8W与12W相比差异无统计学意义，16W显著低于8W、12W，(P<0.01)。②DN组RIP1和RIP3不同时间点比NC组明显增加（P＜0.01）；DN组以上两个指标表达量不同时间点比较，均为2W与4W相比差异无统计学意义，8W、12W、16W显著高2W和4W，差异有统计学意义(P<0.01)，8W与12W相比差异无统计学意义，16W显著高于8W和12W，差异有统计学意义(P<0.01)。③DN组c-FLIP蛋白表达量与RIP1、RIP3呈显著负相关（r=-0.985,p＜0.01;r=-0.986,p＜0.01），与尿蛋白、肾重指数、血清肌酐及尿素氮也呈负相关（r=-0.930,p＜0.01;r=-0.907,p＜0.01;r=-0.575,p＜0.01;r=-0.558,p＜0.01）。
　　5.Real-Time PCR：①DN组不同时间点c-FLIPmRNA相对表达量比NC组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01）；DN组c-FLIP表达量不同时间点比较，均为2W与4W相比差异无统计学意义，8W、12W、16W显著低2W、4W，差异有统计学意义(P<0.01)，8W与12W相比差异无统计学意义，16W显著低于8W和12W(P<0.01)。②DN组RIP1和RIP3不同时间点比NC组明显增加(P＜0.01)；DN组以上两个指标表达量不同时间点比较，均为2W与4W相比差异无统计学意义，8W、12W、16W显著高2W和4W，差异有统计学意义(P<0.01)，8W与12W相比差异无统计学意义，16W显著高于8W和12W，差异有统计学意义(P<0.01)。③DN组c-FLIPmRNA相对表达量与RIP1、RIP3呈显著负相关（r=-0.805,p＜0.01;r=-0.869,p＜0.01），与尿蛋白、肾重指数、血清肌酐及尿素氮也呈负相关（r=-0.877,p＜0.01;r=-0.895,p＜0.01;r=-0.643,p＜0.01;r=-0.499,p＜0.01）。
　　结论：
　　1.糖尿病大鼠肾组织中c-FLIP的表达量减少，并与糖尿病肾组织损伤有关；
　　2.糖尿病大鼠肾组织中细胞坏死性凋亡标志物RIP1和RIP3表达增加，坏死性凋亡途径的激活可导致肾脏组织损伤；
　　3.c-FLIP的表达量与RIP1和RIP3呈负相关，糖尿病肾病时，c-FLIP在肾脏中的低表达可能引起坏死性凋亡途径的激活，进而导致肾脏组织损伤。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料与仪器

1.2 实验方法

2 结果

2.1 各组大鼠一般情况

2.2 主要的血、尿生化指标

2.3 肾脏病理

2.4 免疫组化

2.5 Western blot

2.6 Real-Time PCR结果

3 讨 论

4 结论

参考文献

综述:c-FLIP调控程序性细胞死亡与糖尿病肾病

致谢

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