盐酸右美托咪定对大鼠急性炎性内脏痛镇痛作用的研究

摘要

本研究选定右美托咪定做为研究对象，通过从受体前、受体及受体后水平验证了右美托咪定对急性炎性内脏痛大鼠的脊髓镇痛作用，并从蛋白水平初步探讨了其在急性炎性内脏痛中的部分镇痛机理，为以新的分子靶标为基础，寻找镇痛作用的非阿片类药物提供了新的思路。
　　目的：观察鞘内注射右美托咪定对急性炎性内脏痛大鼠的镇痛作用及其镇痛的部分脊髓机制。
　　方法：
　　1.鞘内注射右美托咪定对炎性内脏痛大鼠的镇痛作用。8-10周龄成年雄性SD大鼠60只，随机分为5组，每组12只：正常对照组(C组)，模型组(N组)，右美托咪定低剂量组(D1组)，右美托咪定中剂量组(D2组)，右美托咪定高剂量组(D3组)。造模前15 min进行鞘内穿刺给药。将10μl10％福尔马林通过肛门注入结肠致痛。造模后以15 min为一个时间段，每15 min进行一次疼痛计分(s)，至2h。采用数字式动物心电图机记录大鼠心率。炭末法观察右美托咪定对大鼠肠推进的影响。HE染色法观察右美托咪定对炎性内脏痛大鼠脊髓的神经毒性。ELISA法检测大鼠脊髓切片孵育液中Ach、NA和AGM水平。
　　2.右美托咪定镇痛作用的部分机制。8-10周龄成年雄性SD大鼠30只，随机分为5组，每组6只：模型组(M组)，右美托咪定组(D组)，右美托咪定+育亨宾组(Y组)，右美托咪定+GF109203X组(G组)，右美托咪定+咪唑克生组(I组)。鞘内注射右美托咪定10μg，15 min后用福尔马林致痛，在致痛后2h处死大鼠。在致痛后30min进行疼痛计分(s)。免疫组化和Western blot等方法检测大鼠脊髓背角神经元中PKCγ、nNOS和PAR-2表达变化。
　　3.统计学处理。用SPSS11.0统计软件进行统计学分析，所有数据均以均数±标准差(x± s)表示，采用单因素方差分析(One-WayANOVA)判断组间差异，采用q检验(Newman-Keuls法)进行组间均数的两两比较。P<0.05为有差异有统计学意义。
　　结果：
　　1.造模15 min后，模型组大鼠疼痛评分即达到最大值，在该时间点显著高于右美托咪定高、中、低剂量组，之后模型组疼痛评分逐渐降低；右美托咪定高、中、低剂量组大鼠疼痛高峰出现于造模30 min后，且疼痛程度较模型组明显减轻，具有剂量依赖性。
　　2.造模成功后，在不同时间点各组大鼠心率之间的比较，差异均无统计学意义。
　　3.模型组大鼠炭末推进率低于正常对照组，右美托咪定各组炭末推进率均高于模型组，且具有剂量依赖性。
　　4. HE染色显示，本研究中右美托咪定高、中、低剂量组的神经元损伤数目没有显著的差异。
　　5.造模120 min后，模型组Ach和NA较对照组明显升高，AGM较对照组明显降低；右美托咪定低、中、高剂量组Ach和AGM均较模型组升高，NA较模型组降低，且右美托咪定的这些作用均具有剂量依赖性。
　　6.在致痛后30min时，育亨宾组和咪唑克生组与其他各组比较差异均有统计学意义。
　　7.免疫组化结果显示，模型组PKCγ及nNOS表达均呈强阳性；右美托咪定组PKCγ及nNOS表达均明显弱于模型组；育亨宾组和咪唑克生组大鼠PKCγ及nNOS表达水平强于右美托咪定组；在GF109203X组，PKCγ表达水平显著弱于模型组和右美托咪定组。
　　8.Western blot结果显示，DEX显著抑制模型组大鼠脊髓nNOS、PKCγ和 PAR2表达，育亨宾组大鼠脊髓nNOS、 PKCγ和 PAR2的表达水平均较DEX组显著升高。咪唑克生组大鼠脊髓PKCγ和PAR2表达水平较DEX组增加。在PKCγ抑制剂GF109203X组，nNOS和 PAR2表达水平与DEX组之间差异无统计学意义。
　　结论：
　　1.鞘内注射右美托咪定对大鼠急性炎性内脏痛模型具有剂量依赖性的镇痛作用，能够推迟疼痛高峰的出现；
　　2.右美托咪定的脊髓镇痛效应中，α2肾上腺能受体和咪唑啉I2受体两者均发挥了作用，但α2肾上腺能受体在镇痛作用中占优势；
　　3.右美托咪定发挥脊髓镇痛作用的机制与其调节神经递质水平，抑制nNOS、PKCγ和PAR-2的表达有关。

目录

声明

缩略词表

第一章 前言

1.1 内脏疼痛机制

1.2 内脏痛觉的调节

1.3内脏疼痛的治疗

1.4 右美托咪定的镇痛相关研究

1.5 研究目的和意义

第二章 鞘内注射DEX对大鼠急性炎性内脏痛镇痛作用的剂量相关性研究

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 讨论

第三章 DEX对大鼠急性炎性内脏痛脊髓镇痛的部分机制

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4 讨论

第四章 结论

4.1 主要结论

4.2 本研究的创新性

4.3 本研究的不足之处

4.4 研究展望

第五章 综述：右美托咪定镇痛作用研究进展

1. 右美托咪定的镇痛作用

2. 右美托咪定的给药方式

3. 右美托咪定的镇痛作用实验研究进展

4. 右美托咪定镇痛作用机制

5. 结语

在学期间的研究成果

致谢